主管檢驗(yàn)師：《答疑周刊》2017年第29期

2017-05-25 09:18 來(lái)源：

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主管檢驗(yàn)師：《答疑周刊》2017年第29期：

1.【問(wèn)題】放射免疫和免疫放射是測(cè)定抗原還是抗體?

【解答】放射免疫分析（RIA）是放射免疫技術(shù)最經(jīng)典的模式。它是以放射性核素標(biāo)記抗原與反應(yīng)系統(tǒng)中未標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合特異性抗體為基本原理來(lái)測(cè)定待檢樣品中抗原量的一種分析方法。而免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素標(biāo)記的過(guò)量抗體與待檢測(cè)抗原直接結(jié)合，采用固相免疫吸附載體分離結(jié)合與游離標(biāo)記抗體的非競(jìng)爭(zhēng)性放射免疫分析。二者的異同點(diǎn)如下：

①標(biāo)記物 RIA 以放射性核素標(biāo)記抗原；IRMA 則是標(biāo)記抗體。

②反應(yīng)速率 IRMA 反應(yīng)速度比RIA 快。

③反應(yīng)原理 RIA 為競(jìng)爭(zhēng)抑制性結(jié)合，反應(yīng)參數(shù)與待檢抗原量成反相關(guān)；IRMA為非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，反應(yīng)參數(shù)與待檢抗原成正相關(guān)。

④特異性 IRMA 特異性較RIA高。

⑤靈敏度和檢測(cè)范圍 IRMA測(cè)定的靈敏度明顯高于RIA， IRMA標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍較RIA寬1～2個(gè)數(shù)量級(jí)。

⑥其他 RIA 所用抗體為多克隆抗體，對(duì)親和力和特異性要求較高，但用量很少；IRMA 為試劑過(guò)量的反應(yīng)，對(duì)抗體親和力的要求不及 RIA，但用量大。

此外，RIA 可以測(cè)量半抗原，但I(xiàn)RMA只能測(cè)定至少有兩個(gè)以上表位的抗原。

2.【問(wèn)題】細(xì)菌在酸性，堿性，弱酸性環(huán)境種都帶負(fù)電荷嗎？

【解答】在接近中性的環(huán)境中細(xì)菌都帶有負(fù)電荷，易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合，故常用堿性苯胺染料如美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等染色細(xì)菌。

1.堿性染料：電離后顯色離子帶正電荷，易與帶負(fù)電荷的被染物結(jié)合。由于細(xì)菌的等電點(diǎn)在pH2～5之間，在堿性、中性、弱酸性的環(huán)境中細(xì)菌均帶負(fù)電荷，易與帶正電荷的染料結(jié)合而著色。常用的染料有堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、美藍(lán)等。

2.酸性染料：電離后顯色離子帶負(fù)電荷，易與帶正電荷的被染物結(jié)合。一般情況下細(xì)菌都帶有負(fù)電荷故不易著色。如果降低菌液的pH使細(xì)菌帶正電荷，則可被染色。酸性染料通常用來(lái)染細(xì)胞漿，而很少用于細(xì)菌的染色。常用的酸性染料有伊紅、剛果紅等。

3.復(fù)合染料（中性染料）及熒光染料：復(fù)合染料是堿性染料和酸性染料的復(fù)合物，如瑞氏染料（伊紅美藍(lán)）、姬姆薩染料（伊紅天青）等；熒光染料如熒光標(biāo)記的抗體，熒光素常用異硫氫基熒光素。這些染色常用于某些特殊的染色技術(shù)中。

3.【問(wèn)題】為什么熒光抗體跟特異性的抗原發(fā)生反應(yīng)后，熒光強(qiáng)度就消失？

主管檢驗(yàn)師：《答疑周刊》2017年第29期