熒光抗體染色與結(jié)果判斷是怎么樣的?
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熒光抗體與抗原反應(yīng),一般在25~37℃,30分鐘,不耐熱抗原的檢測(cè)則以4℃過(guò)夜為宜。
(一)直接法:
用特異熒光抗體直接滴加于標(biāo)本上。本法操作簡(jiǎn)便,特異性高,非特異熒光染色因素少;缺點(diǎn)是敏感度偏低,需制備特異性的熒光抗體。
(二)間接法:
可用于檢測(cè)抗原和抗體,普通一抗+熒光二抗。靈敏度高,僅需一種熒光抗體。
(三)雙標(biāo)記法:
FITC及羅丹明分別標(biāo)記不同的抗體,而對(duì)同一標(biāo)本做熒光染色。
(四)熒光抗體染色結(jié)果判斷:
在每次實(shí)驗(yàn)時(shí)均需設(shè)立實(shí)驗(yàn)對(duì)照(陽(yáng)性和陰性對(duì)照)。陽(yáng)性細(xì)胞的顯色分布有胞質(zhì)型、胞核型和膜表面型三種類型。臨床上根據(jù)特異性熒光強(qiáng)度達(dá)“+”(為熒光較弱但清楚可見(jiàn))以上判定為陽(yáng)性。
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