陽性雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)與凍存
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單個細(xì)胞培養(yǎng)又稱克隆化。細(xì)胞克隆化一般至少進(jìn)行3~5次??寺』幸韵聨追N方法:
(一)顯微操作法
直觀可靠,但操作時間過長,容易增加污染機(jī)會。
(二)有限稀釋法
操作簡單,出現(xiàn)率高,為實(shí)驗(yàn)室最常用的方法。
(三)熒光激活細(xì)胞分選儀
先進(jìn)、高效、高純度、昂貴。
(四)軟瓊脂平板法
本法缺點(diǎn)是瓊脂融化溫度較難掌握,過高會導(dǎo)致細(xì)胞死亡,過低使細(xì)胞分布不均勻,操作較復(fù)雜,克隆出現(xiàn)率不穩(wěn)定。
雜交瘤細(xì)胞應(yīng)及時凍存,以保證細(xì)胞不會因污染或過多傳代變異丟失染色體而喪失功能。目前均采用液氮保存細(xì)胞。(注意逐步降溫、快速復(fù)溫)
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