血紅蛋白測定的檢驗原理是什么呢
血紅蛋白測定的檢驗原理是什么呢?快來跟著小編了解一下吧!
1.氰化高鐵血紅蛋白HiCN測定法:除SHb外
ICSH推薦參考方法,具有操作簡單、顯色快、結(jié)果穩(wěn)定可靠、讀取吸光度后可直接定值等優(yōu)點。致命的弱點是氰化鉀(KCN)試劑有劇毒,使用管理不當可造成公害。
氰化高鐵血紅蛋白測定法操作
(1)直接測定法
①加轉(zhuǎn)化液:試管內(nèi)加5ml HiCN轉(zhuǎn)化液
②采血與轉(zhuǎn)化:取全血20μl,加到盛有轉(zhuǎn)化液的試管底部,用上清液反復沖洗吸管3次,充分混合,靜置5min。
③測定:以符合WH0標準的分光光度計,波長540nm處,光徑(比色杯內(nèi)徑)1.000cm,HiCN轉(zhuǎn)化液或蒸餾水調(diào)零,測定吸光度(A)。
④計算:根據(jù)樣本的吸光度(A)直接計算出血紅蛋白濃度(g/L)
(A為測定管吸光度,44為毫摩爾消光系數(shù),64458/1000為1mol/L Hb溶液中所含Hb克數(shù),251為稀釋倍數(shù)。)
(2)HiCN標準液比色法測定
HiCN參考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),分別測得540nm處的吸光度,以參考液血紅蛋白含量為橫坐標,吸光度為縱坐標,繪制標準曲線或求出K值。
①標準曲線繪制和K值計算
③通過標準曲線查出樣本血紅蛋白濃度,或用K值計算,血紅蛋白濃度Hb(g/L)=K×A。
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