動(dòng)力學(xué)法測定酶促反應(yīng)
動(dòng)力學(xué)法測定酶促反應(yīng),快來跟著小編了解一下吧!
總單位時(shí)間內(nèi)底物減少或產(chǎn)物增加的量。
根據(jù)米氏方程和Lambert-Beer定律可推得:
△A為t2-t1期間反應(yīng)體系吸光度的變化。
ε為消光系數(shù),L為光徑。
從此式可以看出,在t2-t1時(shí)間內(nèi)吸光度的變化與所測物質(zhì)濃度成正比。
實(shí)際操作中,測定兩個(gè)固定時(shí)間的吸光度差值,只要此期間待測物消耗<5%,就可以采用標(biāo)準(zhǔn)濃度對照法計(jì)算樣本濃度,所以動(dòng)力學(xué)法有時(shí)又稱為固定時(shí)間法。
與終點(diǎn)法相比,動(dòng)態(tài)法測定中待測物無須完全轉(zhuǎn)化,故工具酶的用量較少,為了保證有足夠的測定線性,所用酶的Km應(yīng)足夠大。如所用工具酶Km太小,可在反應(yīng)體系中加入競爭性抑制劑,以加大Km。
動(dòng)力學(xué)法對于測定儀器的要求更嚴(yán)格,動(dòng)態(tài)法由于測定反應(yīng)動(dòng)態(tài)過程中的吸光度,檢測的信號小,溫度對測定的影響很大,這要求儀器的電噪聲小,吸光度應(yīng)讀準(zhǔn)到0.0001,溫度變化<0.1%。
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