連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性濃度
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連續(xù)監(jiān)測法具有測定準確等眾多的優(yōu)點,隨著科學技術的發(fā)展,自動生化儀的使用,正在逐步取代“固定時間法”。實際工作中,測酶活性濃度常用酶偶聯(lián)法。
最簡單的酶偶聯(lián)反應為以下模式:
A:底物
B:待測酶產(chǎn)物(不能直接測定)
C:指示酶產(chǎn)物(可以直接測定)
Ex:待測酶
Ei:指示酶
如果一些酶反應找不到合適的指示酶與其直接偶聯(lián),可以加入另一種酶,將兩者連接起來,模式如下:
酶偶聯(lián)反應與一般酶反應的一個重要區(qū)別是有一個明顯的延滯期。從酶反應開始至穩(wěn)態(tài)期間,指示酶反應較慢且不穩(wěn)定,稱為延滯期。
反應體系中不應有中間產(chǎn)物堆積,否則將導致誤差。
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