酶活性測(cè)定法按反應(yīng)時(shí)間分類(lèi)：

1.按反應(yīng)時(shí)間分類(lèi)法：20世紀(jì)50年代以前大都使用固定時(shí)間法。這種方法是以酶催化反應(yīng)的平均速度來(lái)計(jì)算酶的活性，現(xiàn)多已不用。50年代中期開(kāi)始采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法。這種方法用自動(dòng)生化分析儀上完成，可以測(cè)酶反應(yīng)的初速度，其結(jié)果遠(yuǎn)比固定時(shí)間法準(zhǔn)確，在高濃度標(biāo)本尤為明顯，但本法也受到反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)溫度，試劑等的影響，應(yīng)加以注意。

（1）定時(shí)法：（兩點(diǎn)法）

通過(guò)測(cè)定酶反應(yīng)開(kāi)始后某一時(shí)間段內(nèi)（t1到t2）產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來(lái)求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開(kāi)始的時(shí)間。

酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時(shí)間醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)|搜集整理，通過(guò)加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白沉淀劑等，使反應(yīng)完全停止（也叫中止反應(yīng)法）。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反應(yīng)呈色測(cè)出底物和產(chǎn)物的變化。

該法最基本的一點(diǎn)是停止反應(yīng)后才測(cè)定底物或物的變化。

優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單易行，對(duì)試劑要求不高。

缺點(diǎn)：難保證測(cè)定結(jié)果的真實(shí)性。

難以確定反應(yīng)時(shí)間段酶促反應(yīng)是否處于線(xiàn)性期。隨著保溫時(shí)間的延續(xù)，酶變性失活加速。

（2）連續(xù)監(jiān)測(cè)法：又稱(chēng)為動(dòng)力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。

在酶反應(yīng)過(guò)程中，用儀器監(jiān)測(cè)某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間的變化所發(fā)生的改變，通過(guò)計(jì)算求出酶反應(yīng)初速度。

連續(xù)監(jiān)測(cè)法根據(jù)連續(xù)測(cè)得的數(shù)據(jù)，可選擇線(xiàn)性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計(jì)算酶活力。

因此連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定酶活性比定時(shí)法更準(zhǔn)確。

實(shí)際工作中，采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為應(yīng)用最廣、最頻繁測(cè)酶活性濃度的方法。

（3）平衡法：通過(guò)測(cè)定酶反應(yīng)開(kāi)始至反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總變化量來(lái)求出酶活力的方法，又叫終點(diǎn)法。