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    按反應時間測定酶活性

    2015-09-06 08:56 來源:
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    按反應時間測定酶活性:

    20世紀50年代以前大都使用固定時間法醫(yī)學教育網(wǎng)|搜集整理。這種方法是以酶催化反應的平均速度來計算酶的活性,現(xiàn)多已不用。50年代中期開始采用連續(xù)監(jiān)測法。這種方法用自動生化分析儀上完成,可以測酶反應的初速度,其結果遠比固定時間法準確,在高濃度標本尤為明顯,但本法也受到反應時間,反應溫度,試劑等的影響,應加以注意。

    1)定時法:

    通過測定酶反應開始后某一時間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法,稱為兩點法,其中t1往往取反應開始的時間。在酶反應一定時間后,往往通過加入強酸、強堿、蛋白沉淀劑等,使反應完全停止,所以也叫中止反應法。

    2)連續(xù)監(jiān)測法:

    又稱為動力學法或速率法、連續(xù)反應法。在酶反應過程中,用儀器監(jiān)測某一反應產(chǎn)物或底物濃度隨時間的變化所發(fā)生的改變,通過計算求出酶反應初速度醫(yī)學|教育網(wǎng)搜集整理。

    3)平衡法:

    通過測定酶反應開始至反應達到平衡時產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法,又叫終點法。

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