方法名稱：葉酸原料藥－葉酸－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測(cè)定葉酸原料藥中葉酸的含量。

本方法適用于葉酸原料藥。

方法原理：供試品經(jīng)氨溶液溶解后，用水定量稀釋，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)254nm處檢測(cè)葉酸的峰面積，計(jì)算出其含量。

試劑：1. 甲醇

2． 磷酸二氫鉀

3． 0.1mol/L氫氧化鉀溶液

4． 0.5%氨溶液

儀器設(shè)備：1. 儀器

1．1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。

1．3 紫外吸收檢測(cè)器

2． 色譜條件

2．1 流動(dòng)相：以磷酸二氫鉀6.8g與0.1mol/L氫氧化鉀溶液70mL，加水稀釋至850mL，并調(diào)節(jié)pH值至6.3±0.1，加甲醇80mL，用水稀釋成1000mL的溶液

2．2 檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm

2．3 柱溫：室溫

試樣制備：1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取葉酸對(duì)照品約5mg，置25mL量瓶中，加0.5%氨溶液約15mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，即為對(duì)照品溶液。

2． 供試品溶液的制備

精密稱取供試品約5mg，置25mL量瓶中，加0.5%氨溶液約15mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟：分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器于波長(zhǎng)254nm處測(cè)定葉酸（C19H19N7O6）的峰面積，計(jì)算出其含量。

參考文獻(xiàn)：中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，一部，p.109。