異煙肼對結核分枝桿菌有高度選擇性，抗菌作用強，在試管內0.025～0.05mg/L的濃度均可抑菌，較高濃度10mg/L對 繁殖期細菌有殺菌作用。對靜止期的結核桿菌，提高藥物濃度或延長接觸時間也可有殺菌作用。對細胞內外的結核桿菌具有同等的殺滅作用。異煙肼單用易產生耐藥 性，聯(lián)合用藥可延緩耐藥性產生，并增強療效。異煙肼與其他抗結核藥無交叉耐藥性。

異煙肼耐藥機制可能是抑制分枝桿菌酸合成，使細菌喪失耐酸性、疏水性和增殖力而死亡。這可能是異煙肼抑制結核桿菌獨有的分枝菌酸酶的結果。異煙肼對其他細菌無作用。