核酸檢測(cè)方法研究進(jìn)展

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，核酸檢測(cè)越來(lái)越受到人們的重視并將其與抗原抗體反應(yīng)的高特異性結(jié)合起來(lái)形成了免疫PCR技術(shù)。這一技術(shù)具有特異性強(qiáng)和靈敏度高的特點(diǎn)，可用于單個(gè)抗原的檢測(cè)。這促進(jìn)了應(yīng)用PCR技術(shù)進(jìn)行HIV核酸檢測(cè)的快速發(fā)展。自2001年起[25]，COBAS Ampliscreen HIV? 1 Test等4種HIV核酸檢測(cè)技術(shù)通過(guò)了FDA的批準(zhǔn)，作為進(jìn)篩選分析技術(shù)來(lái)進(jìn)行HIV?1的檢測(cè)。最近，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用使HIV核酸檢測(cè)技術(shù)又進(jìn)入到一個(gè)新境界[26]。通過(guò)這種技術(shù)，不但可以進(jìn)行定性檢測(cè)，更重要的是可以進(jìn)行定量檢測(cè)。Barletta等將這一技術(shù)應(yīng)用到HIV的檢測(cè)中，大大降低了病毒載量的檢測(cè)限(0.66個(gè)拷貝相當(dāng)于0.33個(gè)病毒粒子)。2002年4月國(guó)家藥品監(jiān)督管理局(SDA)批準(zhǔn)了第一個(gè)HIV熒光PCR檢測(cè)試劑盒。

p24抗原檢測(cè)方法研究進(jìn)展

隨著檢測(cè)靈敏度不斷提高， p24抗原的檢測(cè)逐漸從主要用于在窗口期輔助早期診斷和進(jìn)一步縮短窗口期，發(fā)展到用于病毒載量測(cè)定。目前，p24抗原在以下幾方面都有重要應(yīng)用：HIV?1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；HIV?1抗體陽(yáng)性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷；第4代HIV?1抗原/抗體ELISA試劑檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，但HIV?1抗體確認(rèn)陰性者的輔助診斷；監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展和抗病毒治療效果。但現(xiàn)有監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展和抗病毒治療效果均采用昂貴、操作復(fù)雜的病毒RNA測(cè)定方法。我國(guó)HIV/AIDS患者絕大部分是在基層，檢測(cè)1次病毒載量需要上千元(約1 500元)，很難在基層普及，對(duì)疾病的治療和控制很不利。高靈敏度p24 抗原檢測(cè)方法的建立成為在發(fā)展中國(guó)家使用的病毒載量測(cè)定方法的一種選擇。

近幾年，國(guó)外對(duì)建立高靈敏度檢測(cè)p24抗原的研究一直沒(méi)有停止，如為了提高檢測(cè)血清中p24抗原的敏感性，將血清中免疫復(fù)合物解離后再進(jìn)行測(cè)定，發(fā)展了ICD p24抗原測(cè)定法。2003年Sutthent[27]等將免疫復(fù)合物熱解離后通過(guò)TSA信號(hào)放大系統(tǒng)使用ELISA進(jìn)行檢測(cè)，使p24抗原檢測(cè)的最小檢出值由原來(lái)的10 pg/mL降低到0.5 pg/mL，在HIV?1抗體陽(yáng)性母親所生嬰兒早期的診斷中與RNA檢測(cè)相當(dāng)，與HIV核酸檢測(cè)具有可比性，具有重要的實(shí)用價(jià)值。2004年，來(lái)自HIV病毒的發(fā)現(xiàn)者之一美國(guó)馬里蘭大學(xué)Dr.Robert C.Gallo所領(lǐng)導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)室的一篇高靈敏度檢測(cè)p24抗原的研究論文引起了廣泛的關(guān)注，p24抗原的檢測(cè)成為比病毒核酸檢測(cè)更靈敏的方法。2005年來(lái)自美國(guó)馬里蘭大學(xué)的一篇長(zhǎng)篇綜述也開始關(guān)注p24抗原的檢測(cè)，認(rèn)為這可以作為低成本、適合在發(fā)展中國(guó)家使用的替代現(xiàn)有昂貴的RNA測(cè)定方法的一種選擇。

目前，商品化的p24 抗原的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法主要是依據(jù)夾心ELISA原理。該方法是用抗p24抗原的抗體包被固相的雙抗體夾心法，是檢測(cè)抗原最為常用的方法，國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)商品化的HIV p24抗原檢測(cè)試劑的生產(chǎn)。綜上所述，用高靈敏的分析方法診斷艾滋病將有助于實(shí)現(xiàn)早期診斷，避免漏檢，有助于對(duì)治療艾滋病藥物的療效評(píng)價(jià)、預(yù)測(cè)和監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)程，提高檢測(cè)的靈敏性、縮短窗口期，是HIV診斷方法和診斷試劑持續(xù)發(fā)展的主要方向。

以上簡(jiǎn)述了HIV的流行概況和實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)技術(shù)，相信隨著HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)的不斷的改進(jìn)，尤其是核酸檢測(cè)技術(shù)的不斷應(yīng)用，HIV檢測(cè)的窗口期將會(huì)逐步縮短，經(jīng)輸血傳播HIV可能性也將會(huì)大大減小。