厭氧菌的分離培養(yǎng)主要分初代培養(yǎng)和次代培養(yǎng)兩個階段，其中初代培養(yǎng)相對比較困難，關(guān)鍵的問題就是厭氧環(huán)境和培養(yǎng)基的選擇。

初代培養(yǎng)的一般原則是：

（1）先將標本涂片染色直接鏡檢，指導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇。

（2）盡量選用在厭氧菌中覆蓋面寬的非選擇性培養(yǎng)基。

（3）最好多選1～2種覆蓋面不同的選擇性培養(yǎng)基。

（4）盡量保證培養(yǎng)基新鮮。

（5）要考慮到微需氧菌存在的可能。

1.選用適當?shù)呐囵B(yǎng)基接種：應(yīng)接種固體和液體兩種培養(yǎng)基；

（1）培養(yǎng)基的使用，應(yīng)注意下列各點：

1）盡量使用新鮮培養(yǎng)基，2～4h內(nèi)用完；

2）應(yīng)使用預(yù)還原培養(yǎng)基，預(yù)還原24～48h更好醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集|整理；

3）可采用預(yù)還原滅菌法制作的培養(yǎng)基（用前于培養(yǎng)基中加入還原劑，如L-半胱氨酸、硫乙醇酸鈉、維生素C及葡萄糖等，盡可能使預(yù)還原劑處于還原狀態(tài)）；

4）液體培養(yǎng)基應(yīng)煮沸10min，以驅(qū)除溶解氧，并迅速冷卻，立即接種；

5）培養(yǎng)厭氧菌的培養(yǎng)基均應(yīng)營養(yǎng)豐富，并加有還原劑與生長刺激因子（血清、維生素K、氯化血紅素、聚山梨酯-80等）。

（2）培養(yǎng)基的選擇：初次培養(yǎng)一般都使用選擇培養(yǎng)基和非選擇培養(yǎng)基。

1）非選擇培養(yǎng)基：本培養(yǎng)基使分離的厭氧菌不被抑制，幾乎能培養(yǎng)出所有的厭氧菌。常使用心腦浸液瓊脂（BHI）、布氏瓊脂（BR）、胰豆胨肝粉瓊脂（GAM）、胰胨酵母瓊脂（EG）、CDC厭氧血瓊脂等。

2）選擇培養(yǎng)基：為有目的選擇常見厭氧菌株，以便盡快確定厭氧的種類。

2.每份標本至少接種3個血平板，分別置于有氧，無氧及5%～10à2環(huán)境中培養(yǎng)，以便正確地培養(yǎng)出病原菌，從而判斷其為需氧菌、兼性厭氧菌、微需氧菌或厭氧菌中的哪一類。

3.厭氧培養(yǎng)法

（1）厭氧罐培養(yǎng)法。

（2）氣袋法。

（3）氣體噴射法：又稱轉(zhuǎn)管法。

（4）厭氧手套箱培養(yǎng)法：是迄今厭氧菌培養(yǎng)的最佳儀器之一。

（5）其他培養(yǎng)法：平板焦性沒食子酸法；生物耗氧法；高層瓊脂培養(yǎng)法。

4.厭氧狀態(tài)的指示：美藍和刃天青。無氧時均呈白色，有氧時美藍呈藍色，刃天青呈粉紅色。

5.分離培養(yǎng)厭氧菌失敗的原因：①培養(yǎng)前未直接涂片和染色鏡檢；②標本在空氣中放置太久或接種的操作時間過長；③未用新鮮配制的培養(yǎng)基；④未用選擇培養(yǎng)基；⑤培養(yǎng)基未加必要的補充物質(zhì)；⑥初代培養(yǎng)應(yīng)用了硫乙醇酸鈉作為唯一厭氧菌培養(yǎng)基；⑦無合適的厭氧罐或厭氧裝置漏氣；⑧催化劑失活；⑨培養(yǎng)時間不足；⑩厭氧菌的鑒定材料有問題。