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    溶血反應(yīng)的檢測試劑-主管技師考試

    2013-12-03 15:14 來源:
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    溶血反應(yīng)的檢測試劑是臨床醫(yī)學(xué)檢驗主管技師考試復(fù)習(xí)需要了解的知識,醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)整理相關(guān)知識如下:

    (一)補(bǔ)體

    檢測血清補(bǔ)體水平或補(bǔ)體活性時需要從受檢者采血及分離血清。做補(bǔ)體結(jié)合試驗時多采用豚鼠血清作為實驗用補(bǔ)體的來源。因為補(bǔ)體在體外極易衰變,所以檢測補(bǔ)體活性的血清標(biāo)本和作為補(bǔ)體試劑的血清必須新鮮。

    受檢者一般做靜脈采血,在動物可做心臟采血。血清分離后應(yīng)及時使用,最好在當(dāng)日用完。必須保存時采用小量分裝的辦法,置-70℃下可保存數(shù)月,避免反復(fù)凍融。凍干制品可長期保存,但其活性都不同程度地比新鮮血清降低。

    以豚鼠血清作補(bǔ)體來源時,應(yīng)考慮到個體差異。為了確保血清中補(bǔ)體的有效活性,必須取3只以上豚鼠的血清混合后使用。

    (二)綿羊紅細(xì)胞

    從綿羊頸靜脈無菌采血,抽出血液后立即小心地注入放有玻璃珠的無菌干燥三角燒瓶中,充分旋搖15~20min,以除去纖維蛋白。也可將羊血與等量或2倍量的Alsever血液保存液混合,既有抗凝作用,又適于儲存;分裝后置4℃,可使用3周。

    實驗前,取適量抗凝血,加入8~10倍的生理鹽水,輕輕混勻后2000r/min離心5min;棄上清,沉淀的紅細(xì)胞用生理鹽水再洗一次,這時上清為無色澄清,如顯紅色說明有溶血現(xiàn)象,應(yīng)更換新鮮羊血;第三次用緩沖液洗滌,棄上清,取壓積紅細(xì)胞用緩沖液配制SRBC懸液,使用濃度一般為2%~5%。為使紅細(xì)胞濃度標(biāo)準(zhǔn)化,可吸取少量紅細(xì)胞懸液,中入20~30倍的稀釋液中,在542nm波長比濁,以吸光度為標(biāo)準(zhǔn)調(diào)整紅細(xì)胞濃度。

    (三)溶血素

    溶血素即抗綿羊紅細(xì)胞抗體,多是以綿羊紅細(xì)胞免疫家兔而得到兔抗血清。一般沒有必要進(jìn)一步提純抗體,但在試驗前需先進(jìn)行加熱56℃30min或60℃3min以滅活補(bǔ)體。

    由于補(bǔ)體溶血試驗及補(bǔ)體結(jié)合試驗均是比較精密的試驗,其結(jié)果與溶血素的效價有關(guān),所以試驗需要滴定溶血素效價;在制備抗血清的過程中,于動物采血前和分離抗血清后也需要滴定溶血素效價。

    (四)稀釋緩沖液

    磷酸緩沖液或巴比妥緩沖液等均可用于溶血試驗,pH值應(yīng)調(diào)至7.2~7.4之間。另加入適量氯化鈉以保持等滲,并適當(dāng)?shù)丶尤胍恍┾}離子和鎂離子,這是補(bǔ)體活化所不可缺少的。有的配方還加入0.1%的明膠以使蛋白溶液穩(wěn)定;加入0.01%NaN3可以防腐,利于較長時間保存。

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