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    毛細(xì)管電泳技術(shù)

    2011-01-25 08:13 來(lái)源:
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      CE是一項(xiàng)迅速發(fā)展的分離技術(shù),主要用于生物大分子的分離,如DNA和被十二烷基磺酸鈉 (SDS)飽和的蛋白質(zhì),是在一根內(nèi)徑25~100μm毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行的,毛細(xì)管中充入交聯(lián)聚合物,聚合物起到了分子篩的作用,使質(zhì)量電荷比相同的物質(zhì)能夠按照分子由小到大的順序流出,從而實(shí)現(xiàn)了分離。分辨率高于高效液相色譜,進(jìn)樣量只需 1~50nl,在毛細(xì)管上開(kāi)一檢測(cè)窗口,直接進(jìn)行柱上檢測(cè),靈敏度較高,而且樣品前處理非常簡(jiǎn)便,適用于大量臨床樣品的分析。CE有多種分離模式,其中毛細(xì)管凝膠電泳已越來(lái)越廣泛地用于基因診斷、基因治療等臨床分子生物學(xué)領(lǐng)域。

      毛細(xì)管凝膠電泳與傳統(tǒng)的板式或管式凝膠電泳相比,具有以下特點(diǎn):(1 )分辨率高,因?yàn)槊?xì)管電泳可以施加比板式電泳高 10~100倍的場(chǎng)強(qiáng),毛細(xì)管本身已經(jīng)具有抗對(duì)流作用,不必再使用具有抗對(duì)流性的凝膠:(2 )分析速度快;(3 )定量更加準(zhǔn)確,避免了電泳染色時(shí)因時(shí)間、溫度、染色劑濃度和放置時(shí)間不同而產(chǎn)生的誤差;(4)靈敏度更高,毛細(xì)管電泳為柱上檢測(cè),如使用激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器,檢測(cè)限可以提高到10-18到10 –21mol/L;(5)實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作。能夠進(jìn)行制備性分離是板式凝膠電泳的優(yōu)點(diǎn),醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)|收集整理目前毛細(xì)管電泳使用大孔徑毛細(xì)管和低場(chǎng)強(qiáng),只可以進(jìn)行少量制備,這項(xiàng)技術(shù)更適合于臨床實(shí)驗(yàn)室高靈敏度快速分析的要求。

      應(yīng)用CE對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行分析可以克服常規(guī)瓊脂糖電泳或聚丙烯酰胺凝膠電泳等方法分析速度慢、操作繁瑣、定量結(jié)果誤差大、自動(dòng)化程度低的缺點(diǎn),現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于病原體、腫瘤和遺傳病的基因診斷,如病原體特異基因檢測(cè)、基因突變檢測(cè)、DNA序列分析等。

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