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    臨床蛋白電泳基本技術(shù)

    2011-01-07 17:28 來源:
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      1.醋酸纖維素薄膜電泳

      醋酸纖維素是指纖維素的羥基乙?;纬傻睦w維素醋酸酯,由該物質(zhì)制成的薄膜稱為醋酸纖維薄素薄膜。它具有電滲小、分離速度快、分離清晰、血清用量少及操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)已廣泛用于血清蛋白、血紅蛋白、糖蛋白、脂蛋白和同工酶等的分離和測(cè)定。

      2.凝膠電泳

      凝膠電泳根據(jù)支持介質(zhì)的不同可分為淀粉膠、瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠電泳等。瓊脂糖凝膠孔徑較大,對(duì)蛋白質(zhì)一般不起分子篩作用,適用于分離同工酶及其亞型,大分子核酸等。聚丙烯酰胺凝膠具有分子篩作用,有更高的分辨率,普遍用于分離蛋白質(zhì)及小分子核酸。

      3.等電聚焦電泳(isoelectricfocusing,IEF)

      等電點(diǎn)是蛋白質(zhì)的一個(gè)重要性質(zhì),測(cè)定等電點(diǎn)的方法是在不同pH條件下測(cè)量蛋白質(zhì)的電泳遷移率,然后用遷移率對(duì)pH作圖,對(duì)應(yīng)于遷移率為零的pH就是蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。按照蛋白質(zhì)等電點(diǎn)不同而進(jìn)行分離的電泳方法稱為蛋白質(zhì)等電聚焦電泳。由于其分辨率可達(dá)到0.01pH單位,故特別適用于分離分子量相近而等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)組分。

      4.毛細(xì)管電泳(capillaryelectrophoresis,CE)

      毛細(xì)管電泳是八十年代初發(fā)展起來的一類高效、快速分離分析方法。同其它技術(shù)相比,毛細(xì)管電泳具有分辨率高、塔板數(shù)高、選擇性好、定量準(zhǔn)確、所需樣品少等特點(diǎn)。毛細(xì)管電泳將電泳載體移到毛細(xì)管中后,醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)|收集整理克服了傳統(tǒng)電泳的熱擴(kuò)散和試樣擴(kuò)散的難題,大大提高了分析的靈敏度。因而它是一種比傳統(tǒng)電泳優(yōu)越得多的分離分析技術(shù)。毛細(xì)管電泳可分為毛細(xì)管區(qū)帶電泳、凝膠電泳、等速電泳、等電聚焦和膠束電動(dòng)色譜等。

      在生命科學(xué)中廣泛使用的是毛細(xì)管區(qū)帶電泳(capillaryzoneelectrophoresis,CZE)。毛細(xì)管區(qū)帶電泳是近年發(fā)展起來的一種高效、快速的液相分離分析技術(shù),有分離選擇性高、檢測(cè)靈敏度高、分離快速、操作簡(jiǎn)便和易自動(dòng)化等特點(diǎn),現(xiàn)已開始在臨床實(shí)驗(yàn)診斷中得到逐步地應(yīng)用。

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