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    簡(jiǎn)述分子生物學(xué)分型法

    2009-11-16 14:52 來(lái)源:
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      分子生物學(xué)分型法又稱DNA分型法其靈敏度高,陳舊微量標(biāo)本可檢測(cè),克服CDC和MLC的不足,前景廣闊。

      (一)聚合酶鏈反應(yīng)與SSP分型法方法

      采用一系列設(shè)計(jì)的特異性引物,作HLA基因PCR擴(kuò)增,一對(duì)特異性引物只能擴(kuò)增出結(jié)構(gòu)與其互補(bǔ)的基因片段,根據(jù)引物擴(kuò)增結(jié)果,能確定檢樣的基因型。

      評(píng)價(jià):只需作PCR擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物檢測(cè),快速簡(jiǎn)便醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。

      (二)PCR-SS0分型法

      序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSO)是PCR與雜交相結(jié)合的技術(shù)。關(guān)鍵:預(yù)先知道Ⅱ類基因的核苷酸序列,設(shè)計(jì)出恰當(dāng)?shù)奶结?。評(píng)價(jià):需合成大量DNA探針,操作步驟多,適合大規(guī)模分型和配型。

      (三)RFLP與PCR-RFLP分型法

      限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分析,是最早建立的研究HLA多態(tài)性的DNA分型技術(shù)。

      方法:PCR擴(kuò)增的基因片段→等位特異的內(nèi)切酶消化→切成長(zhǎng)度不一、數(shù)量不等的基因片段→電泳分離,根據(jù)一系列內(nèi)切酶解格局可確定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的基因型。

      關(guān)鍵:預(yù)知Ⅱ類基因的核苷酸序列,并據(jù)此找到合適的內(nèi)切酶。

      評(píng)價(jià):不需同位素,簡(jiǎn)便,適合小規(guī)模分型醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。

      (四)PCR-SSCP分型法

      單鏈構(gòu)象特異性-聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSCP),是以待測(cè)基因PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ),對(duì)擴(kuò)增的DNA單鏈進(jìn)行多態(tài)性分析的HLA分型方法。該法簡(jiǎn)單、快速、精確,已初步應(yīng)用于異基因骨髓移植的配型工作。

      (五)SBT分型法

      基于序列的HLA分型法,是一種通過(guò)對(duì)擴(kuò)增后的HLA基因片段進(jìn)行核酸序列測(cè)定,從而判斷HLA型別的方法。

      方法:PCR擴(kuò)增出的HLA基因片段純化,自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序。

      評(píng)價(jià):直接、精確、價(jià)格昂貴,主要用于新等位基因的鑒定。

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