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    實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)HSV-2的方法學(xué)建立

    2009-03-17 14:15 來(lái)源:
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      摘 要:目的建立一種快速、特異、準(zhǔn)確定量的單純皰疹病毒2型(HSV-2)檢測(cè)方法。

      方法 構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD18-T-gG作為標(biāo)準(zhǔn)品。以HSV-2的gC基因區(qū)為靶基因區(qū),設(shè)計(jì)合成引物和探針,采用TaqMan MGB技術(shù)對(duì)HSV-2進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PGR檢測(cè),優(yōu)化反應(yīng)體系,并進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。

      結(jié)果 成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD18-T-gG.建立利用TaqMan MGB技術(shù)的real-time PGR方法,其重復(fù)性較好[批內(nèi)CV(變異系數(shù))值為2.29%,批間CV值為4.76%]、特異性較好(對(duì)HSV-1、Veto細(xì)胞、巨細(xì)胞病毒、弓形蟲(chóng)等無(wú)特異性擴(kuò)增)、線性范圍好(4.75×101~4.75×106 copies/μl,r=0.998),靈敏度達(dá)到47.5 copies/μl;與ELISA法進(jìn)行比較,認(rèn)為前者的靈敏度更高、檢測(cè)時(shí)間更短。

      結(jié)論 建立的TaqMan MGB PGR方法能夠快速準(zhǔn)確、特異、靈敏地對(duì)HSV-2進(jìn)行定量分析,可為臨床診斷提供幫助。

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