借助抗原和抗體在體外特異結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象,對(duì)樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性、定量、定位的檢測(cè)。
1.抗原與抗體的親和力(affinity)抗原抗體的結(jié)合就像酶與底物的結(jié)合,激素與其受體的結(jié)合一樣不是化學(xué)的反應(yīng),而是非共價(jià)鍵的可逆的結(jié)合??乖瓫Q定簇和抗體分子可變區(qū)互補(bǔ)構(gòu)型,造成兩分子間有較強(qiáng)的親和力??臻g構(gòu)型互補(bǔ)程度不同,抗原和抗體分子之間結(jié)合力強(qiáng)弱也不同。互補(bǔ)程度高,則親和力強(qiáng)。此外,反應(yīng)溫度、酸堿度和離子濃度對(duì)抗原和抗體分子上各基因的解離性和電荷特性也有重要的影響,抗體與抗原決定簇之間的結(jié)合力大小可用親合力來(lái)表示。高親合力的抗體與抗原的結(jié)合力強(qiáng),即使抗原濃度很低時(shí)也有較多的抗體結(jié)合抗原形成免疫復(fù)合物。
2.抗原或抗體外檢測(cè)原理根據(jù)抗原抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物的性狀與活性特點(diǎn),對(duì)標(biāo)本中的抗原或抗體進(jìn)行定性、定位或定量的檢測(cè)。定性和定位檢測(cè)比較簡(jiǎn)單,即用已知的抗體和待檢樣品混合,經(jīng)過(guò)一段時(shí)間,若有免疫復(fù)合物形成的現(xiàn)象發(fā)生,就說(shuō)明待檢樣品中有相應(yīng)的抗原存在。若無(wú)預(yù)期的現(xiàn)象發(fā)生,則說(shuō)明樣品中無(wú)相應(yīng)的抗原存在。同理也可用已知的抗原檢測(cè)樣品中是否有相應(yīng)抗體。
對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定量檢測(cè)時(shí),以反應(yīng)中加入抗原和抗體的濃度與形成免疫復(fù)物的濃度呈函數(shù)關(guān)系。
?。?)根據(jù)免疫復(fù)合物產(chǎn)生的多少來(lái)推算樣品中抗原(或抗體)的含量:在一定的反應(yīng)條醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理件下,加入的已知抗體(或抗原)的濃度一定,反應(yīng)產(chǎn)生的免疫復(fù)合物多少與待檢樣品中含有相應(yīng)抗原(或抗體)量成正比。也就是抗體濃度一定時(shí),免疫復(fù)合物越多則樣品中的抗原量也越多??捎脤?shí)驗(yàn)性標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出樣品中抗原(或抗體)的含量。如免疫單向擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫比濁試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫檢測(cè)等都屬于這類方法。
?。?)抗原或抗體效價(jià)滴定的原理:當(dāng)抗原抗體復(fù)合物形成多少不能反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)強(qiáng)弱時(shí),就不能以檢測(cè)反應(yīng)強(qiáng)度來(lái)對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定量。在實(shí)際工作中,把濃度低的反應(yīng)成分(抗原或抗體)的濃度固定,把濃度高的另一種反應(yīng)成分作一系列稀釋。例如用人血清作抗原免疫3只家兔,比較3只家兔產(chǎn)生抗體的多少,即滴定3只兔血清抗體效價(jià),可用雙向瓊脂擴(kuò)散法來(lái)滴定,例如將抗體濃度固定,將抗原作不同的稀釋度,分別將抗原或抗體滴入瓊脂的相應(yīng)小孔中,觀察免疫兔血清與不同稀釋度的抗原出現(xiàn)明顯沉淀淺的抗原稀釋度(如甲兔的抗體效價(jià)為1/2000,而丙免的是1/8000則可比較出后者比前者產(chǎn)生抗體的效價(jià)要高)。也就是表示效價(jià)的稀釋度越高,樣品中所含待檢成分越多。因人血清(抗原)和抗體(免疫兔血清)相比,濃度高,故應(yīng)稀釋抗原。
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