取肝素抗凝血經(jīng)分層液(比重1.077)離心分離單個(gè)核細(xì)胞,配成一定的濃度加入塑料培養(yǎng)板孔中溫育1-3小時(shí),洗去未粘附細(xì)胞,然后每孔加入含一定濃度LPS的細(xì)胞培養(yǎng)液,繼續(xù)溫育一定時(shí)間,收集上清液檢測IL-1活性。
IL-1活性最常用的檢測法是小鼠胸腺細(xì)胞增殖反應(yīng)。該法原理:IL-1可輔助ConA或PHA等刺激小鼠胸腺細(xì)胞的增殖,增殖細(xì)胞的DNA合成增加。在細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束前6小時(shí)加入3H-TdR,待培養(yǎng)結(jié)束時(shí)收集細(xì)胞,檢測放射性強(qiáng)度,即可判斷IL-1活性。由于IL-1能促進(jìn)小鼠T細(xì)胞傳代株LBRM-33和EL-4分泌IL-2,當(dāng)含IL-1待檢樣品加入上述細(xì)胞培養(yǎng)液,則培養(yǎng)上清IL-2增加,醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)|收集整理再用IL-2依賴細(xì)胞株測定分泌IL-2的多少,可間接推測樣品中IL-1含量。其他IL的生物學(xué)檢測方法大致相同,增殖反應(yīng)細(xì)胞常采用IL的依賴株。