1.分離培養(yǎng):通常由正常無菌部位采取的標本接種血平板,置于空氣或含5%~10%CO2的氣缸中培養(yǎng),大部分細菌可于24~48h生長良好。若原始培養(yǎng)為陰性,但據(jù)鏡檢結(jié)果和臨床信息提示可能有病原菌存在,則應(yīng)再采集大量標本,離心濃縮或溶解離心法處理,取沉淀接種營養(yǎng)豐富的需氧或厭氧培養(yǎng)基來培養(yǎng)。
對于存在正常菌群部位采集的標本,分離時應(yīng)采用選擇培養(yǎng)基以利于病原菌生長,也可加某些抗生素抑制污染菌的生長。對于某些感染標本中發(fā)現(xiàn)的細菌,如尿路感染的尿液中檢出大腸埃希菌,可能是病原菌,也可能是污染菌或正常菌群,其臨床意義的確定有賴于定量培養(yǎng)法。即取一定量的標本如液體標本用液體培養(yǎng)基作一系列稀釋;組織標本稱量后制成懸液,并稀釋成10-1,10-2,10-3等,分別取0.1ml涂布于血瓊脂平板或傾注培養(yǎng),35℃24h后計算每克標本所含細菌數(shù)醫(yī)學|教育網(wǎng)搜集整理。
2.鑒定:分離出的細菌一般應(yīng)經(jīng)過細菌形態(tài)、菌落特點、生化反應(yīng)、血清學試驗、動物接種等鑒定。目前尚有某些微量鑒定系統(tǒng),其鑒定快速、簡便,值得推廣。如用于鑒定腸桿菌科的20E,鑒定非發(fā)酵菌的20NE及鑒定厭氧菌的20A等。
3.體外純菌藥物敏感性試驗:常用方法包括抑菌試驗、殺菌試驗、聯(lián)合藥敏試驗和檢測細菌產(chǎn)生的抗生素滅活酶等。