CRISPR/Cas9是一項(xiàng)革命性的基因編輯技術(shù)，得到廣泛應(yīng)用。我們從兩個(gè)方面著手提高CRISPR/Cas9的編輯效率。我們利用附著體載體表達(dá)Cas9和gRNA，稱之為epiCRISPR技術(shù)。附著體載體不整合到基因組，但是可以隨著細(xì)胞的分裂而復(fù)制，因而可以長(zhǎng)期的表達(dá)外源基因，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期的基因編輯。同時(shí)在附著體載體上表達(dá)嘌呤霉素抗性基因，可以富集轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。編輯完成后撤除篩選藥物，附著體質(zhì)粒迅速丟失，編輯后的細(xì)胞不再表達(dá)外源基因。利用附著體技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)高達(dá)100%編輯效率，還可以高效的敲除基因組大片段，以及同時(shí)敲除多個(gè)基因。CRISPR/Cas9編輯效率受gRNA序列影響，不同的gRNA效率差別很大，測(cè)試gRNA效率費(fèi)時(shí)費(fèi)力。我們建立了高通量的測(cè)試gRNA活性的方法，得到了5萬多條gRNA的活性，覆蓋了2萬多個(gè)人類基因。這些工作將會(huì)極大的方便基因編輯工作。