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應用于光鏡的免疫組織化學染色的切片厚度一般要求5μm左右，神經組織的研究要求切片厚度在20-100μm,有利于追蹤神經纖維的走行。

1、冰凍切片：

是免疫組織化學染色中最常用的一種切片方法。其最突出的優(yōu)點是能夠較完好地保存多種抗原的免疫活性，尤其是細胞表面抗原更應采用冰凍切片。新鮮的組織及已固定的組織均可作冰凍切片。

冰凍時，組織中水分易形成冰晶，往往影響抗原定位。一般認為冰晶少而大時，影響較小，冰晶小而多時，對組織結構損害較大，在含水量較多的組織中上述現(xiàn)象更易發(fā)生。醫(yī)學教育網|搜集整理冰晶的大小與其生長速率成正比，而與成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的數量愈多則愈小，對組織結構影響愈嚴重。因此，應盡量降低冰晶的數量。Fish認為冰凍開始時，冰晶成核率較慢，以后逐漸增加，其臨界溫度為-33℃,從-30℃降至-43℃之間，成核率急劇增加達1018,然后再減慢?；谏鲜隼碚摽刹扇∫韵麓胧p少冰晶的形成。

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