【摘要】 目的：研究人類(lèi)白細(xì)胞抗原G（HLAG）在子宮內(nèi)膜異位癥患者在位和異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)，探討HLAG分子在內(nèi)異癥發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：采用鏈霉素抗生物素蛋白過(guò)氧化物酶（SP）法檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥患者19例在位子宮內(nèi)膜和30例異位內(nèi)膜中HLAG分子的表達(dá)水平， 以30例非子宮內(nèi)膜異位癥患者的子宮內(nèi)膜作為對(duì)照。 結(jié)果：內(nèi)異癥在位子宮內(nèi)膜和異位內(nèi)膜HLAG的陽(yáng)性表達(dá)率（42%，53%）均顯著性高于對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜（P<0.01），但在內(nèi)異癥在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜之間HLAG的陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)顯著性差異（P>0.05）。 結(jié)論：異常表達(dá)的HLAG分子可能在內(nèi)異癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著作用。
【關(guān)鍵詞】 人類(lèi)白細(xì)胞抗原G； 子宮內(nèi)膜異位癥； 免疫組織化學(xué)
0引言
子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，簡(jiǎn)稱(chēng)內(nèi)異癥）是婦產(chǎn)科常見(jiàn)多發(fā)病，發(fā)病率達(dá)10%～15%［1］，近年來(lái)有逐漸增高的趨勢(shì)。 已有研究表明，內(nèi)異癥是一種免疫性疾病，其發(fā)生與機(jī)體的免疫應(yīng)答系統(tǒng)密切相關(guān)。 人類(lèi)白細(xì)胞抗原（HLA）是人類(lèi)的主要組織相容性復(fù)合物，以往大多都是研究經(jīng)典HLA分子與內(nèi)異癥的相關(guān)性，而極少涉及非經(jīng)典分子。 HLAG分子屬于非經(jīng)典的HLAⅠ類(lèi)分子，它參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)，主要表現(xiàn)為免疫抑制功能。 我們通過(guò)測(cè)定內(nèi)異癥患者在位和異位內(nèi)膜組織中HLAG分子的表達(dá)，探討HLAG在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的作用。
1對(duì)象和方法
1.1對(duì)象
標(biāo)本來(lái)源于200412/200510在我院經(jīng)剖腹或腹腔鏡手術(shù)且病理檢查證實(shí)為卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的患者。 其中，異位內(nèi)膜30例，年齡37～51（43.5±4.9）歲，在位子宮內(nèi)膜19例，年齡40～51（45.3±4.2）歲。 對(duì)照組為30例非子宮內(nèi)膜異位癥患者且經(jīng)病理證實(shí)的正常子宮內(nèi)膜，年齡39～54（44.6±4.62）歲。 兩組患者均為湖北籍漢族女性，術(shù)前3 mo內(nèi)均未患過(guò)感染性疾病，未用內(nèi)異癥治療藥物或激素類(lèi)藥物，未接受過(guò)免疫抑制劑治療。 生化及Ｘ線攝片檢查均無(wú)肝炎、糖尿病、結(jié)核、腫瘤或其他自身免疫性疾病。 兩組患者年齡差異無(wú)顯著性（P>0.05）， 無(wú)血緣關(guān)系?？笻LAG分子mAb（美國(guó)Alexis公司），SP超敏試劑盒（福州邁新生物試劑公司）。
1.2方法
1.2.1標(biāo)本處理
標(biāo)本經(jīng)40 g/L甲醛固定，石蠟包埋，3 μm厚連續(xù)切片，HE染色，做病理組織學(xué)檢查。
1.2.2免疫組化染色
采用SP法，主要步驟如下：①常規(guī)處理后，加入第一抗體，即鼠抗人HLAG mAb，濕盒中4℃過(guò)夜；②加入第二抗體，即生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG，37℃濕盒中10 min；③加入鏈霉菌抗生物素過(guò)氧化物酶，37℃濕盒中10 min；④二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，常規(guī)脫水、透明、中性膠封固。 因HLAG分子在組織分布上有一定的局限性，故選胎盤(pán)組織為陽(yáng)性對(duì)照。
1.2.3染色結(jié)果判斷HLAG以子宮內(nèi)膜細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，在400倍光鏡下至少觀察5個(gè)視野，陽(yáng)性細(xì)胞＞5%定義為陽(yáng)性，≤5%為陰性［2］。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 10.0進(jìn)行分析。 各組之間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有顯著性。
2結(jié)果
SP法染色陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色，HLAG抗原陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)或細(xì)胞膜上。 對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜HLAG抗原的表達(dá)均呈陰性。 在內(nèi)異癥組，有8例在位子宮內(nèi)膜（圖1A）和16例異位內(nèi)膜組織（圖1B）中的內(nèi)膜細(xì)胞呈不同程度的陽(yáng)性染色。 內(nèi)異癥在位子宮內(nèi)膜HLAG抗原的陽(yáng)性表達(dá)率（42%）顯著性高于對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜（P<0.01，表1）；內(nèi)異癥異位子宮內(nèi)膜HLAG抗原的陽(yáng)性表達(dá)率（53%）顯著性高于對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜（P<0.01）；內(nèi)異癥在位子宮內(nèi)膜與異位子宮內(nèi)膜HLAG抗原的陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
A：在位子宮內(nèi)膜； B：異位子宮內(nèi)膜。表1在位子宮內(nèi)膜和異位子宮內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜中HLAG抗（略）
3討論
HLAG分子主要表現(xiàn)免疫抑制功能，抑制NK細(xì)胞、部分T細(xì)胞的細(xì)胞溶解作用及誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞凋亡［3］；HLAG通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌，使Th1/Th2平衡移向Th2方向，引起免疫抑制［4］。 HLAG還可影響細(xì)胞因子的分泌，如IL10，IL13，TNFα，IFNγ等［5］，致使細(xì)胞因子分泌紊亂也可能引起機(jī)體免疫耐受。
我們的研究發(fā)現(xiàn)：內(nèi)異癥在位子宮內(nèi)膜HLAG抗原的陽(yáng)性表達(dá)率（42%）顯著性高于對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜。 因而推測(cè)當(dāng)在位子宮內(nèi)膜脫落異位到機(jī)體其他部位時(shí)，其早已異常表達(dá)的HLAG分子可能通過(guò)以上幾種途徑協(xié)助該內(nèi)膜逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，不被清除，并成功種植生長(zhǎng)。 而對(duì)于沒(méi)有HLAG分子“保護(hù)”的正常子宮內(nèi)膜異位后將會(huì)被機(jī)體的免疫系統(tǒng)所識(shí)別并清除。 這就可能解釋了為什么多數(shù)婦女有經(jīng)血反流現(xiàn)象，但只有少數(shù)人發(fā)展成為內(nèi)異癥。 由此可見(jiàn)內(nèi)異癥患者在位子宮內(nèi)膜是不同于正常子宮內(nèi)膜的，在位子宮內(nèi)膜中異常表達(dá)的HLAG分子可能使其具有異位種植生長(zhǎng)的潛能，對(duì)于內(nèi)異癥的發(fā)生起到一定的作用。
我們還發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥異位子宮內(nèi)膜HLAG抗原的陽(yáng)性表達(dá)率（53%）顯著性高于對(duì)照組正常子宮內(nèi)膜。 此實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Barrier等［6］的最新研究結(jié)果是一致的。 但Hornung等［7］在內(nèi)異癥患者異位內(nèi)膜中并未檢測(cè)到HLAG分子的表達(dá)，這可能是由于研究對(duì)象的選擇和樣本量過(guò)小造成的差異。
內(nèi)異癥異位內(nèi)膜HLAG的陽(yáng)性表達(dá)率略高于其在位內(nèi)膜，推測(cè)可能在腹腔內(nèi)某些細(xì)胞因子的作用下，使脫落后異位種植的內(nèi)膜即異位內(nèi)膜HLAG的表達(dá)得以上調(diào)。 也有相關(guān)研究已證實(shí)某些細(xì)胞因子如IFNγ和IL10可以刺激細(xì)胞表達(dá)HLAG［8-9］。 而在位子宮內(nèi)膜與異位子宮內(nèi)膜HLAG抗原的陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)顯著性差異，說(shuō)明在位內(nèi)膜的異?？赡懿攀菍?dǎo)致內(nèi)異癥發(fā)病的主要原因，也進(jìn)一步論證了“在位內(nèi)膜決定論”這一新學(xué)說(shuō)。 有研究發(fā)現(xiàn)HLAG分子也異常表達(dá)于某些腫瘤細(xì)胞如腎細(xì)胞癌［10］和基皮細(xì)胞癌［11］，說(shuō)明內(nèi)異癥在其免疫發(fā)病機(jī)制上與腫瘤細(xì)胞的種植免疫可能相類(lèi)似。 這可能也是內(nèi)異癥表現(xiàn)的臨床生物學(xué)行為與惡性腫瘤相似的原因。 因此我們認(rèn)為，HLAG分子的表達(dá)可能導(dǎo)致清除逆流子宮內(nèi)膜碎片的能力下降，使子宮內(nèi)膜細(xì)胞得以黏附、種植和生長(zhǎng)，從而增加內(nèi)異癥發(fā)生、發(fā)展的可能性。
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