?。壅?nbsp; 目的  研究苦丁茶提取物對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用。方法  對(duì)昆明種小鼠每日經(jīng)口分別灌胃給予0.05 g/kg、0.10 g/kg和0.30 g/kg的苦丁茶提取物。30天后，以0.12 ml/10 g BW一次灌胃給予50%乙醇。測(cè)定小鼠肝勻漿中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）和甘油三酯（TG）含量“同時(shí)觀察肝臟病理。結(jié)果  各劑量組肝組織MDA含量均值分別為1.13、1.44、1.90 nmol/100 mg蛋白，低于乙醇對(duì)照組2.30 nmol/100 mg蛋白（P<0.05）；TG含量均值分別為1.14、1.38、1.41 mmol/100 mg肝，低于乙醇對(duì)照組1.95 mmol/100 mg肝（P<0.01）；GSH含量分別為16.47、16.03、14.70 μmol/g，高于乙醇對(duì)照組12.73 μmol/g（P<0.01）；各劑量組肝臟病理改變?cè)u(píng)分均低于乙醇對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論  苦丁茶提取物對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用。

　　［關(guān)鍵詞］  苦丁茶提取物；乙醇；肝損傷

　　Protective effects of ilex kudincha extracts on alcoholic liver injury

　　CHEN Rui-yi“TAN Jian-bin”WANG Feng-yan“et al.Center for Disease Control and Prevention of Guangdong Province”Guangzhou 510300“China

　?。跘bstract］  Objective  To study the protective effects of  ilex kudincha extracts on ethanol liver injury.Methods  KM mice were given Ilex kudincha extracts orally at the dose of 0.05 g/kg，0.10 g/kg and 0.30 g/kg daily.30 days later“0.12 ml/kg （50%） ethanol were intraperitoneally injected.The liver malondialdehyde （MDA）”triacylglycerol（TG）“and glutathione（GSH） content were measured and liver tissue fat drop lets staining in the ice pathological slice were observed.Results  The content of liver MDA”TG in the 3 dose groups were all significantly decreased“both compared with the ethanol control group”while the content of liver GSH in the 3 dose groups were all significantly increased“both compared with the ethanol control group.The mice liver tissue fatty degeneration scores in 3 dose groups were lowered”both compared with the ethanol control group.Conclusion  Ilex kudincha extracts  had protective effects on ethanol liver injury in mice.

　?。跭ey words］  ilex kudincha extracts；ethanol；liver injury

　　苦丁茶（Ilex kudingcha C.J.Tsing）應(yīng)用的歷史悠久“藥源地域廣”資源豐富。近年來(lái)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究表明“其主含的三萜類成分”具有清熱解毒、生津、提神、益智和抗衰老、調(diào)節(jié)血壓和血脂等功效［1～3］。 本文以昆明小鼠為研究對(duì)象，以乙醇做染毒物，探討苦丁茶提取物對(duì)酒精性肝損害的保護(hù)作用。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料  樣品苦丁茶提取物為淺黃色粉末，膠囊裝，由深圳某生物科技公司提供。

　　1.1.1  動(dòng)物  SPF級(jí)昆明種小白鼠，雌性，6～8周齡，體重18～22 g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：2004A063，質(zhì)量合格證編號(hào)：NO 0009990.顆粒飼料亦由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

　　1.1.2  儀器及試劑  日立7600-010全自動(dòng)生化儀。MDA、GSH檢測(cè)試劑盒由南京建成提供“TG檢測(cè)試劑盒由中生北控生物技術(shù)股份有限公司提供。

　　1.2  實(shí)驗(yàn)方法  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室條件下檢疫3天后，隨機(jī)分成空白對(duì)照組、乙醇對(duì)照組及低、中、高3個(gè)劑量組，每組12只小鼠。3個(gè)劑量組每天分別按不同劑量灌胃給予受試物，空白對(duì)照組和乙醇對(duì)照組按同等容量灌胃給予純凈水。動(dòng)物每周稱重，以調(diào)整受試樣品劑量，共30天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各劑量組和乙醇對(duì)照組以0.12 ml/10 g BW劑量一次灌胃給予50%乙醇，空白對(duì)照組灌胃給予相同劑量純凈水，各組動(dòng)物禁食16 h后處死，取肝組織制成肝勻漿，測(cè)定丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）、甘油三酯（TG），并取肝臟左葉冰凍切片，蘇丹Ⅲ染色，光鏡下觀察病理變化。

　　1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法  統(tǒng)計(jì)資料采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，統(tǒng)計(jì)方法采用方差分析和秩和檢驗(yàn)。

　　2  結(jié)果

　　2.1  對(duì)受試動(dòng)物肝組織MDA、TG和GSH含量的影響  見(jiàn)表1.乙醇對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，MDA、TG含量升高，GSH降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明乙醇肝損傷模型成立。

　　高劑量組MDA含量與乙醇對(duì)照組比較降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其余各劑量組MDA、TG含量與乙醇對(duì)照組比較降低；GSH含量與乙醇對(duì)照組比較升高，差異均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。表明MDA、TG和GSH結(jié)果陽(yáng)性。

　　2.2  苦丁茶提取物對(duì)受試動(dòng)物肝臟病理變化的影響  見(jiàn)表2.乙醇對(duì)照組和各劑量組動(dòng)物的肝臟病理改變以肝細(xì)胞脂肪變性為主，病變部位主要在肝小葉周圍。乙醇對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，有明顯的肝臟損傷（肝細(xì)胞脂肪變性），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明乙醇肝損傷模型成立。

　　各劑量組肝細(xì)胞脂肪變性評(píng)分與乙醇對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟病理結(jié)果陽(yáng)性。

　　表1  苦丁茶提取物對(duì)MDA、TG、GSH水平的影響  （x±s）

　　注：與空白對(duì)照組比較，△P<0.05，△△P<0.01（T-test）；與乙醇對(duì)照組比較， *P<0.05，**P<0.01 （Oneway ANOVA analysis）

　　表2  苦丁茶提取物對(duì)受試動(dòng)物肝臟病理變化得分

　　注：與空白對(duì)照組比較， △△P<0.01（T-test）；與乙醇對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01 （Kruskal-Wallis test）；0：大致正常；Ⅰ：脂滴肝細(xì)胞不超過(guò)1/4；Ⅱ：脂滴肝細(xì)胞不超過(guò)1/2；Ⅲ：脂滴肝細(xì)胞不超過(guò)3/4；Ⅳ：肝組織幾乎被脂滴代替

　　3  討論

　　化學(xué)性肝損傷主要來(lái)源于生產(chǎn)生活中接觸的化學(xué)性毒物、酗酒和醫(yī)源性藥物損害。乙醇性肝損傷居于食物性肝損傷的第一位“機(jī)體大量攝入間接肝毒物乙醇后”在乙醇脫氫酶的催化下大量脫氫氧化，使三羧循環(huán)障礙和脂肪酸氧化減弱而影響脂肪代謝，乙醇可致α-磷酸甘油增多而促進(jìn)甘油三酯合成，致使脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)沉積；同時(shí)乙醇能激活氧分子，產(chǎn)生氧自由基導(dǎo)致肝細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化及體內(nèi)還原型谷胱甘肽的耗竭；同時(shí)研究證實(shí)酒精中毒可以直接引起肝臟纖維化“并由纖維化直接進(jìn)入肝硬化［4］。為減少化學(xué)性肝損傷發(fā)生率，有必要研究開(kāi)發(fā)具有護(hù)肝作用的生物源性物質(zhì)。除宏觀的預(yù)防保護(hù)措施外”保健食品及其功效物質(zhì)在增強(qiáng)體質(zhì)、提高抵抗力“加速化學(xué)毒物的代謝解毒和解酒方面可發(fā)揮較好作用。本次實(shí)驗(yàn)中觀察到苦丁茶提取物可抑制乙醇誘導(dǎo)的肝臟中MDA 和TG含量的升高，可使乙醇誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性的程度降低，與楊彪等的苦丁茶提取物離體肝組織脂質(zhì)過(guò)氧化抑制作用的研究結(jié)果相符［5～7］。表明苦丁茶提取物對(duì)酒精所致化學(xué)性肝損傷具有保護(hù)作用，飲酒前后能攝入一些苦丁茶及其制品可減輕酒精對(duì)肝臟的損害。

　?。蹍⒖嘉墨I(xiàn)］

　　1  楊杏林，范海鷹。中藥苦丁茶的研究開(kāi)發(fā)述評(píng)。內(nèi)蒙古中醫(yī)藥“2003”3：261.

　　2  Nishimura K“Fukuda T”Miyase T“et al.Activity-guided isolation of triterpenoid acyl CoA cholesteryl acyl transferase （ACAT） inhibitors from Ilex kudincha.J Nat Prod”1999“62（7）：1061-1064.

　　3  Ouyang MA“Wang HQ”Chen ZL“et al.Triterpenoid glycosides from Ilex kudincha.Phytochemistry”1996“43（2）：443-445.

　　4  江正輝“王泰齡。酒精性肝病。北京： 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社”2001“100-107.

　　5  王新?？喽〔瓒嗳~化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展。天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)“2005”17（1）：366-370.

　　6  Gui SY“Wei W”Wang H“et al.Protective effect of fufanghuangqiduogan against acute liver injury in mice.World J Gastroenterol”2005“11（19）：2984-2989.

　　7  楊彪。苦丁茶提取物抗氧化作用的研究。廣西民族學(xué)院學(xué)報(bào) （自然科學(xué)版）“2000”6（2）：108-110.