【摘要】  目的 探索三葉蟲茶對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用。方法 8%的醋酸灌腸大鼠建立潰瘍性結(jié)腸炎動物模型，24 h后給藥，連續(xù)14天，觀察大鼠毛色、糞便、體重變化情況。造模第14天，觀察大鼠結(jié)腸病理組織學(xué)損傷情況，計算結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)（CMDI）。結(jié)果 模型組大鼠潰瘍形成，陽性對照組和給藥組大鼠的CMDI等指標(biāo)均明顯改善（P<0.01）。結(jié)論 三葉蟲茶能明顯減少炎細胞浸潤，對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎有明顯的抵抗作用。

　　【關(guān)鍵詞】  三葉蟲茶；提取物；潰瘍性結(jié)腸炎；動物模型

　　Effect of the extract from Sanye Chongcha （an excrement of black rice worm，aglossa dimidiata）  on rat‘s colonitis

　　XU Guang-ming，WEN Li-zhang，LIN Yan，et al.Faculty of Pharmacetics，TCM University of Hunan，Changsha 410007，China

　?。跘bstract］  Objective  To explore the effect on rat‘s colonitis of excrement of aglossa dimidiata that generally is called Chongcha or Sanye Chongcha in Chinese，which means tea manufactured from insect excrement or “insect-tea”。Chinese have favored Chongcha for some centuries for its medicinal properties.Methods  The rat’s colonitis was induced by 8% acetic acid.Twenty hours later，the rats were given the medicine  and the hair color and   stool  had been observing for two weeks.The mucosal damage index（CMDI） and histopathology of the colon were observed on the 21st day.Results  Distinct colonitis was observed in the model groups.CMDI and  other index were significantly improved in the  medicine groups（P<0.01）。Conclusion  Treatment with  the extracted aglossa Dimidiata shows beneficial effects on rat ulcerative colonitis.

　　［Key words］  sanye chongcha；insect excrement；ulcerative colonitis；animal model

　　用三葉海棠葉飼喂米縞螟（aglossa dimidiata）幼蟲，然后取其排泄物作藥用或茶用，在我國湖南，廣西一帶民間已流傳數(shù)百年之久，當(dāng)?shù)匾卜Q之為“蟲茶”。從明代李時珍著《本草綱目》（1578年）至今許多學(xué)術(shù)專著對蟲茶均有記載。三葉蟲茶是我國的土特產(chǎn)，是熱帶、亞熱帶地區(qū)高溫作業(yè)人員的重要飲料。喝蟲茶不僅清涼甘美，而且有很好的醫(yī)療作用。伍菊英［1］報道了對潰瘍性結(jié)腸炎的治療；文禮章等對三葉蟲茶的生物安全性及化學(xué)成分等展開了許多研究［2，3］。本實驗開展了蟲茶提取物抗大鼠潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colonitis，UC）的初步研究，為進一步研究蟲茶治療潰瘍性結(jié)腸炎的有效部位或有效成分，探索利用三葉蟲茶作為新一代抗?jié)冃越Y(jié)腸炎中草藥提供重要依據(jù)。

　　1  材料與方法

　　1.1  儀器  800型離心機（上海手術(shù)儀器廠），SHZ-D循環(huán)水式真空泵（鞏義英嶼華儀器廠），B5 professional seriers生物顯微圖像采集系統(tǒng)（麥克奧迪有限公司），F(xiàn)inesse-325切片機（廣州華俊醫(yī)療器械有限公司）。

　　1.2  材料  三葉蟲茶（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲研究所提供）、大鼠（湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物中心）、丙酮（A.R）、冰醋酸（A.R）、生理鹽水、蒸餾水、柳氮磺吡啶片（上海福達制藥有限公司，批號：C60903）。

　　1.3  方法

　　1.3.1  三葉蟲茶提取物及陽性對照液的制備  （1）蟲茶水提物樣品液：稱取 56 g 蟲茶，用10倍體積的新沸蒸餾水，80 ℃回流提取30 min，抽濾，濾渣同法再提取1次，合并2次濾液，80 ℃水浴濃縮至280 ml.同法再提取1次，合并2次濾液，濃縮至280 ml，即得蟲茶水提液（含生藥0.2 g/ml）。（2）蟲茶丙酮提取物樣品液：稱取56 g蟲茶，用10倍體積80％的丙酮，80 ℃回流提取30 min，抽濾，濾渣同法再提取1次，合并2次濾液，減壓回收丙酮，直到所有的丙酮回收完，再用新沸的蒸餾水定容到280 ml，即得蟲茶丙酮提取物溶液（含生藥0.2 g/ml）。（3）陽性對照液：將柳氮磺吡啶片按人與動物劑量關(guān)系，用蒸餾水溶解，制成83 mg/ml的柳氮磺吡啶溶液。

　　1.3.2  大鼠模型的制備  參照Zahavi等［4］學(xué)者造模方法，?。?00±20）g大鼠50只，分成空白組、模型組、水提物組、丙酮提取物組和陽性對照組，每組均為10只。實驗前，各組大鼠48 h禁食不禁水，然后乙醚麻醉，將導(dǎo)管經(jīng)肛門插進8cm.空白組：注入1 ml生理鹽水，大鼠頭部朝下，肛門朝上手托20 s后，再注入2 ml生理鹽水沖洗1次；模型組和給藥組：將導(dǎo)管經(jīng)肛門插進8 cm，注入1 ml 8％ 醋酸，余同空白組操作。

　　1.3.3  給藥方法  造模24 h后，空白組和模型組給水灌胃，其余3組按1 ml/100 g體重，分別用陽性對照液、水提物液、丙酮提取物液灌胃給藥，每日1次，連續(xù)14天。

　　1.4  檢測指標(biāo)  造模及用藥期間每日觀察實驗大鼠的毛發(fā)光澤度、大便性狀等情況和體重變化。用藥14天后處死全部動物，觀察結(jié)腸腸壁膨脹、腸壁外周粘連，糜爛面等情況。用甲醛溶液固定結(jié)腸組織，常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色，用顯微鏡觀察。

　　1.5  統(tǒng)計學(xué)方法  采用統(tǒng)計軟件SPSS 12.0行配對t檢驗。

　　2  結(jié)果

　　2.1  肉眼觀察  觀察結(jié)果如表1.從表1中看出，毛色及糞便：模型組大鼠毛色枯黃，糞便變稀。水提物組隨著灌胃給藥的進行，毛色日漸變得油光發(fā)亮，恢復(fù)健康毛色，糞便由稀便變成顆粒狀糞便。丙酮提取物組，陽性藥物組，有同樣的轉(zhuǎn)變，在時間順序上，先是陽性藥物組，其次為丙酮提取物組，最后是水提物組。而空白組大白鼠始終是毛色健康，有一定的光澤，糞便成顆粒狀。體重：14天后，除模型組，各給藥組體重都有增加，但增加程度不同。肉眼觀察實驗中，陽性藥物組的大鼠藥效最好，其次為丙酮提取物組，最后為水提物組。表1  給藥期間大鼠情況

　　2.2  解剖觀察  模型組：全部大白鼠腸壁膨脹巨大變薄，腸壁外周粘連嚴(yán)重，腸壁黏膜組織壞死，結(jié)腸水腫明顯，糜爛面上有黑黃色膜狀物附著；空白組和陽性藥物組：結(jié)腸有一定的彈性，腸管黏膜皺襞紋理清晰，未見糜爛和潰瘍；給藥組與模型組比，結(jié)腸有明顯好轉(zhuǎn)，大部分已經(jīng)恢復(fù)正常，有一定的彈性，只有少數(shù)腸管變粗，腸壁有些膨脹巨大變薄，但無明顯糜爛潰瘍。總體來說，丙酮提取物組優(yōu)于水提物組。

　　2.3  結(jié)腸切片觀察結(jié)果  結(jié)腸病理組織切片見圖1.觀察結(jié)果：空白組結(jié)腸組織正常，腺體中杯狀細胞顯著。模型組黏膜高度充血、水腫、上皮潰瘍形成，局部壞死、大量炎性細胞浸潤，大范圍的腸上皮壞死，腺體中杯狀細胞顯著減少。陽性對照組腺體中杯狀細胞顯著，炎細胞浸潤。水提物組炎細胞浸潤，黏膜上皮修復(fù)，黏膜修復(fù)，肉芽組織增生明顯。丙酮提取物組炎細胞浸潤明顯輕微，黏膜上皮修復(fù)，部分上皮組織再生，上皮潰瘍壞死明顯減輕，炎性細胞浸潤亦有所緩解。

　　2.4  結(jié)腸黏膜損傷評價  本文結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)（CMDI）的半定量標(biāo)準(zhǔn)參照Vilaseca等［5，6］學(xué)者的評分標(biāo)準(zhǔn)加以調(diào)整而建立，見表2.根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)，對各實驗組結(jié)腸病理組織切片綜合評分，用統(tǒng)計軟件SPSS 12.0 配對t檢驗，結(jié)果見表3.統(tǒng)計表明，水提物組和丙酮提取物組與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與陽性對照組比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），由此說明給藥組能明顯抵抗結(jié)腸潰瘍的形成，對結(jié)腸潰瘍有明顯治療作用。表2  結(jié)腸黏膜損傷評分標(biāo)準(zhǔn)表3  各組CMDI的比較 注：與模型組比較，*P<0.01；與陽性對照組比較，△P>0.05

　　3  討論

　　本實驗采用潰瘍性結(jié)腸炎醋酸化學(xué)法動物模型，造成的急性UC損傷模型，具有造模時間短、容易復(fù)制、結(jié)腸損傷（糞便變化、毛色變化、體重變化、潰瘍、糜爛、淋巴細胞浸潤程度）明顯的特點，適合于新藥的篩選研究［7］。實驗發(fā)現(xiàn)，三葉蟲茶的水提物和丙酮提取物能明顯抵抗UC的產(chǎn)生，糞便變化、毛色變化、體重變化、潰瘍、糜爛、淋巴細胞浸潤等各項指標(biāo)均明顯改善，說明三葉蟲茶能抵抗UC的形成，對UC有一定治療作用。實驗中丙酮提取物的效果稍好，其原因有待進一步開展研究。

　　潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一種病因尚未完全清楚的炎癥性腸病，其臨床主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、膿血便。從已有的報道看，參與UC發(fā)病機制的因素有免疫、遺傳、環(huán)境、自由基損傷等。UC時，腸黏膜中大量吞噬細胞耗氧量增加，通過一系列反應(yīng)，產(chǎn)生大量氧自由基O-   .、OH-及脂質(zhì)過氧化物（ROO-）等，他們在引起脂質(zhì)氧化的同時，可增加黏膜的通透性，使吞噬細胞活動進一步加強，產(chǎn)生更多的氧自由基，從而導(dǎo)致組織細胞的損傷，損傷腸黏膜［8］。三葉蟲茶中含有多酚類物質(zhì)［2］，其水提物或丙酮提取物含大量的多酚類物質(zhì)，多酚類物質(zhì)具有很強的抗氧化活性，是人體自由基的清除劑［9，10］。及時清除氧自由基，可降低腸黏膜組織細胞的損傷。本文為三葉蟲茶治療UC的初步研究，尚需大量的工作來證實三葉蟲茶中的有效成分。

　　【參考文獻】

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　　2 文禮章。三葉蟲茶的生物安全性及其主要化學(xué)成分分析。湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1996，22（6）：574-579.

　　3 文禮章。三葉蟲茶的安全性毒理學(xué)評價。中國食品學(xué)報，2004，4（2）：83-87.

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