近日，第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院皮膚科劉玲碩士等在完成的一項國家自然科學基金資助課題中，采用細胞內(nèi)PCR擴增抗體基因的方法，成功構(gòu)建一庫容量為3×10⁶白癜風的噬菌體抗體庫。該抗體庫的建立，為進一步研究自身抗體在白癜風發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其治療提供了嶄新的思路。

　　據(jù)介紹，白癜風是一種常見的皮膚色素脫失性疾病。近年來有研究表明，白癜風與自身免疫密切相關(guān)，其患者體內(nèi)存在抗黑素細胞膜自身抗體，導致黑素細胞破壞，引起自身損傷。然而，對于“自身抗體在疾病發(fā)生發(fā)展中究竟是始動因素還是繼發(fā)反應”這一問題一直存在爭議。

　　為探討自身抗體機制的新思路，劉玲等研究人員采用細胞內(nèi)PCR擴增的方法，選擇100例（男48例，女52例，平均年齡21歲，平均病程兩個月）進展期白癜風患者血樣，通過PCR1反轉(zhuǎn)錄、擴增輕鏈和重鏈可變區(qū)基因、Cre重組酶介導、單個細胞內(nèi)輕重連接獲取體內(nèi)原始配對信息，以及經(jīng)振蕩篩選等系列技術(shù)處理后，成功地構(gòu)建出一庫容量為3×10⁶的白癜風噬菌體抗體庫。

　　該抗體庫經(jīng)抗體表達、特異性檢測及吸附篩選等檢驗，結(jié)果顯示：細胞內(nèi)PCR擴增ScFv基因，目的條帶為800bp，與預期大小相符；取20個單菌落提取質(zhì)粒進行凝膠電泳，19個可見800bp目的條帶，重組率達95%。通過4輪“親和吸附-洗脫-擴增”篩選，特異性噬菌體抗體回收率增加約67倍，并獲得1株特異性針對黑素細胞膜抗原的抗體。提示抗體庫具有重組率高、特異性強、親和力好、抗體基因信息準確等特點。

　　研究人員認為，細胞內(nèi)PCR技術(shù)，是一種全新的擴增抗體可變區(qū)基因方法，它在同一個載體上的輕鏈與重鏈的配對，不是人工隨機組合，而是在體內(nèi)的原始配對，從人免疫細胞中擴增體內(nèi)親本配對的單鏈抗體可變區(qū)基因，克隆到噬菌體載體，同時利用完整細胞篩選特異性針對黑素細胞膜抗原的自身抗體，從而得到編碼疾病相關(guān)抗體基因的準確信息。采用該技術(shù)能從分子水平上闡述自身抗體的產(chǎn)生機制、編碼基因規(guī)律及基因突變特點。