主管檢驗(yàn)師：《答疑周刊》2018年第41期：

1.【問(wèn)題】ONPG是什么意思？

【解答】β-半乳糖苷酶試驗(yàn)（ONPG試驗(yàn)）

（1）原理：有的細(xì)菌可產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，能分解鄰硝基酚β-D-半乳糖苷（ONPG），而生成黃色的-硝基酚（O-nitrophenol），在很低濃度下也可檢出。

（2）試劑：0.75M ONPG溶液：取80mg溶于15ml蒸餾水中，在加入緩沖液（6.9gNaH2PO4，溶于45ml蒸餾水中，用30%NaOH調(diào)整pH為7.0，再加水至50ml）5ml，置于4℃冰箱中保存。ONPG溶液為無(wú)色，如出現(xiàn)黃色，則不應(yīng)再用。

（3）方法：從培養(yǎng)基上取菌，于0.25ml無(wú)菌生理鹽水中制成菌懸液，加入一滴甲苯并充分振搖，使酶釋放。將試管置37℃水浴5分鐘，加入0.25ml ONPG試劑，水浴20分鐘～3小時(shí)觀察結(jié)果。

（4）結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽(yáng)性反應(yīng)，一般在20～30分鐘內(nèi)顯色。

（5）應(yīng)用：迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽(yáng)性，而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性。本實(shí)驗(yàn)主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。

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