2019年臨床檢驗(yàn)技士考試備考進(jìn)行的怎么樣了呢？小編為大家整理了需要掌握的知識(shí)，希望可以幫到大家。

辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)廣泛分布于植物中，因辣根中含量最高而得名，由無色酶蛋白和深棕色鐵卟啉(輔基)構(gòu)成一種糖蛋白(含糖18%)。此酶溶于水和50%飽和度以下的硫酸銨溶液。

HRP分子量較小(40kDa)，標(biāo)記物容易穿透入細(xì)胞內(nèi)部;作用底物為H2O2，以二氨基聯(lián)苯胺(DAB)為供氫體的反應(yīng)產(chǎn)物為不溶性的棕色吩嗪衍生物，可用普通光鏡觀察;在pH3.5~12范圍內(nèi)穩(wěn)定，對(duì)熱及有機(jī)溶劑的作用亦較穩(wěn)定，能耐受63℃加熱15min;用甲苯與石臘包埋切片處理或用純乙醇及10%甲醛水溶液固定作冰切片均不影響其活性;溶解性好，100mL緩沖鹽溶液中可溶解5gHRP，并可溶解于62%飽和度以下的硫酸銨溶液中，故常用硫酸銨分級(jí)沉淀法分離純化;氰化物、硫化物、氟化物、及疊氮化物等對(duì)HRP的活性有抑制作用，應(yīng)避免使用NaN3作為酶標(biāo)試劑的防腐劑，以防止失活。

凡能在HRP和H2O2存在時(shí)被酶催化H2O2反應(yīng)而和成有色產(chǎn)物的化合物(供氫體)都可以用顯色劑。供氫體的產(chǎn)物分不溶性和可溶性兩類。前者最常用的為3，3'二氨基聯(lián)苯胺(3,3'diaminobenzidine,DAB)，適用于免疫組化法;反應(yīng)后的氧化型中間體迅速聚合，形成不溶性棕色吩嗪衍生物;這種多聚物還能還原和螯合四氧化餓，形成具有電子密度的產(chǎn)物，適用電鏡檢查;此外還有飽和聯(lián)苯胺溶液，氧化后產(chǎn)物呈黃褐色，多用于酶免疫擴(kuò)散的深沉線顯色。后者最常用的為鄰苯二胺(O-phenylene diamine,OPD)，產(chǎn)物橙色，可溶性、敏感性高，最大吸收值為490nm，可用肉眼判別;易被濃酸終止反應(yīng)，顏色可數(shù)小時(shí)不變，是ELISA中最常用的一種;但對(duì)光敏感，使用時(shí)要避光，并發(fā)現(xiàn)有致癌作用。

用HRP標(biāo)記抗體需借助交聯(lián)劑的作用，將酶連接在抗體分子上。常用的交聯(lián)劑為過碘酸鈉和戊二醛(glutaraldehyde,CHO-(CH2)3-CHO)。

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