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    酶活性測定樣品的貯存與處理

    2012-03-28 13:42 來源:
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    如果在測定活性之前所貯的樣品酶活性有了降低,無論所用的儀器如何先進(jìn),也不能獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。在適當(dāng)?shù)臈l件下酶會失活,因而必須強(qiáng)調(diào)在收集樣品之后應(yīng)盡可能快速測試酶活性,最好當(dāng)天進(jìn)行測定。關(guān)于酶樣品的貯存與處理應(yīng)注意以下幾點:

    1.酶活力測定最常用的樣品是血清或血漿。制備血漿所用的抗凝劑可抑制某些酶的活性,如EDTA能抑制ALP,草酸鹽抑制LDH,肝素對CK及某些其他酶有輕微的抑制作用,故一般樣品以血清為佳。

    2.多數(shù)血清酶以較高濃度存在于紅細(xì)胞、白細(xì)胞或血小板中。因此分離血清時應(yīng)注意避免溶血。

    3.光照對CK活性有抑制作用,因此,主張CK測定的血清應(yīng)貯存于4℃的暗處,測定時應(yīng)該注意避光。

    4.由于血清白蛋白對酶蛋白有穩(wěn)定作用,在它的存在下,某些酶在室溫下可保存1~2天而無明顯失活。

    5.有些酶由于自身的特性,在貯存時需特別加以注意。例如LDH同工酶在冰箱保存不穩(wěn)定,在室溫反而穩(wěn)定時間較長,所以測定LDH活力的血清樣品,應(yīng)置于室溫下,2~3天內(nèi)可保持穩(wěn)定,不能存放冰箱過夜。

    6.由于酶很容易發(fā)生表面變性,因此在操作時應(yīng)避免形成泡沫。

    7.巰基對于大多數(shù)酶來說是十分重要的,可能起如下幾方面的作用:①參與催化;②和底物結(jié)合;③組成變構(gòu)部位;④維持酶的三級或四級結(jié)構(gòu)。因此,使巰基保持天然狀態(tài)是使許多酶穩(wěn)定化的最重要的條件之一,基于這個理由,在酶的活性測定、抽提、制備以及保存過程中,??商砑樱璖H保護(hù)劑,如半胱氨酸、谷胱甘肽、2-巰基乙醇、二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇等。

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