（1）取本品粉末1g，加甲醇10ml，在水浴上回流10min，濾過(guò)。濾液稍濃縮后，取1ml，加濃鹽酸4-5滴及鎂粉（或鋅粉）少許，在沸水浴中加熱3min，溶液呈粉紅色。（檢查黃酮類(lèi)）（2）薄層色譜取本品粉末約1g，酸性乙醇回流提取，濾過(guò)。濾液回收乙醇，殘?jiān)?%鹽酸約5ml溶解，用氨水堿化，氯訪(fǎng)提取3次，合并提取液，用無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)。濾液濃縮至1ml，為樣品液。以普羅托品、紫堇靈為對(duì)照品。點(diǎn)樣于堿性硅膠G薄層板上，以氯仿-乙醚-乙醇-氨水（18：2：1：0.05）展開(kāi)10cm。取出，晾干，噴以改良碘化秘鉀試劑，供試品色譜與對(duì)照品色譜在相應(yīng)位置顯相同橘紅色斑點(diǎn)。（檢查生物堿類(lèi)）

方法名稱(chēng)： 苦地?。陷漓`的測(cè)定－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測(cè)定苦地丁中紫堇靈的含量。

本方法適用于罌粟科植物紫堇Corydalis bungeana Turcz.的干燥全草。

方法原理： 本品加甲醇超聲處理，放冷，補(bǔ)重，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)289nm處檢測(cè)紫堇靈的吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑： 1. 甲醇

2. 0.015mol/L磷酸鹽緩沖液（pH6.7）：取磷酸二氫鉀1.58g和磷酸氫二鉀0.76g，加水1000mL溶解，混勻，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至6.7。

儀器設(shè)備： 1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按紫堇靈峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2色譜條件

2.1流動(dòng)相：甲醇 0.015mol/L磷酸鹽緩沖液（pH6.7）=70 30

2.2檢測(cè)波長(zhǎng)：289nm

2.3柱溫：室溫

試樣制備： 1. 稱(chēng)取供試品

精密稱(chēng)定本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）0.5g，為供試品。

2. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取紫堇靈對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含40mg的溶液。

3. 供試品溶液的制備

取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，浸泡1小時(shí)，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液。

操作步驟： 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器于波長(zhǎng)289nm處測(cè)定紫堇靈（C21H21O5N）的峰面積，計(jì)算出其含量。

參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，一部，p139。