（1） 取本品，置顯微鏡下觀察：淀粉粒三角狀卵形或矩圓形，直徑24～40μm,臍點(diǎn)短縫狀或人字狀。不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊無色，遇水合氯醛液溶化；菌絲無色或淡棕色，直徑4～6μm 。薄壁組織灰棕色至黑棕色，細(xì)胞多皺縮，內(nèi)含棕色核狀物。草酸鈣針晶成束或散在，長26～110μm。草酸鈣簇晶存在于無色薄壁細(xì)胞中，有時數(shù)個排列成行。果皮表皮細(xì)胞橙黃色，表面觀類多角形，垂周壁略連珠狀增厚。薄壁細(xì)胞類圓形，有橢圓形紋孔，集成紋孔群。纖維束鮮黃色，周圍細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維，含晶細(xì)胞的壁木化增厚。（2） 取本品水蜜丸6g，研碎；或取小蜜丸或大蜜丸9g，切碎。加乙醚15ml，振搖15分鐘，放置1 小時，濾過，濾液揮去乙醚，殘?jiān)颖?ml 使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對照品，加丙酮制成每1ml 含1mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上使成條狀，以環(huán)己烷－醋酸乙酯（3:1） 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性 5%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色條斑。

（3） 取本品2g，切碎，加甲醇5ml ，加熱回流15分鐘，濾過，取濾液，補(bǔ)加甲醇使成5ml ，作為供試品溶液。另取黃柏對照藥材0.1g，同法制成對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml 含0.5mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯－醋酸乙酯－甲醇－異丙醇－濃氨試液（12:6:3:3:1）為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm） 下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色熒光斑點(diǎn)；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的一個黃色熒光斑點(diǎn)。

含量測定

取本品水蜜丸或小蜜丸，切碎，取水蜜丸6g或小蜜丸12g，精密稱定；或取重量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，混勻，取12g，精密稱定。加水30ml，放置使溶散，濾過，藥渣用水30ml洗滌，在室溫干燥至呈松軟的粉末狀，在100℃烘干，連同濾紙一并置索氏提取器中，加乙醚適量，加熱回流提取4小時，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔眩?0～60℃）浸泡2次，每次15ml（浸泡約2分鐘），傾去石油醚，殘?jiān)舆m量無水乙醇-氯仿（3:2）的混合液，微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加上述混合液至刻度，搖勻,作為供試品溶液。另精密稱取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，精密吸取供試品溶液5μl、對照品溶液2μl與4μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸（20:5:8:0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加熱5～7分鐘，至斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法（附錄Ⅵ B薄層掃描法）進(jìn)行掃描，波長：λs=520nm，λR=700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。本品含山茱萸以熊果酸（C30H48O3）計(jì)，水蜜丸每1g不得少于0.15mg，小蜜丸每1g不得少于0.090mg，大蜜丸每丸不得少于0.81mg。

測定方法

方法名稱：

知柏地黃丸－丹皮酚的測定－高效液相色譜法。

應(yīng)用范圍：

本方法采用高效液相色譜法測定知柏地黃丸中丹皮酚的含量。

本方法適用于中成藥知柏地黃丸。

方法原理：

本品加甲醇超聲處理，放冷，補(bǔ)重，搖勻，濾過，續(xù)濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長274nm處檢測丹皮酚的吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑：

本品加甲醇超聲處理，放冷，補(bǔ)重，搖勻，濾過，續(xù)濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長274nm處檢測丹皮酚的吸收值，計(jì)算出其含量。

甲醇

儀器設(shè)備：

1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3500。

1.3 紫外吸收檢測器

2色譜條件

2.1流動相：甲醇 水=70 30

2.2檢測波長：274nm

2.3柱溫：室溫

試樣制備：

1. 稱取供試品

取本品水蜜丸，研碎，取0.4g，精密稱定；或取小蜜丸或重量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，混勻，取0.5g，精密稱定，為供試品。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取丹皮酚對照品適量，加甲醇制成每1mL含15mg溶液。

3. 供試品溶液的制備

供試品，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）45分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

操作步驟：

分別精密吸取對照品溶液10mL和供試品溶液20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長274nm處測定丹皮酚（C9H10O3）的峰面積，計(jì)算出其含量。

參考文獻(xiàn)：

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，一部，p494。