方法名稱： 戊己丸—總生物堿的測(cè)定—分光光度法

應(yīng)用范圍： 本方法采用分光光度法測(cè)定戊己丸中總生物堿（以鹽酸小檗堿計(jì)算）的含量。

本方法適用于中成藥戊己丸。

方法原理： 供試品置索氏提取器經(jīng)鹽酸-甲醇（1:100）適量回流提取后，定容。取一定量置氧化鋁柱凈化，收集乙醇洗脫液，定容。取一定量加0.05mol/L硫酸溶液定容。置紫外可見分光光度計(jì), 于波長(zhǎng)345nm處測(cè)定吸收度，以鹽酸小檗堿（C20H17NO4·HCl）的吸收系數(shù)（E1% 1cm）728計(jì)算總生物堿含量。

試劑： 1. 鹽酸

2. 甲醇

3. 硫酸(0.05mol/L)

4.氧化鋁柱 (內(nèi)徑0.9cm，中性氧化鋁5g，濕法裝柱，用30mL乙醇預(yù)洗)

儀器設(shè)備： 1. 紫外-可見分光光度計(jì)

2. 索氏提取器

試樣制備： 供試品溶液的制備

取供試品粉末過三號(hào)篩（50目），精密稱取0.7~0.9g,置索式提取器中，加鹽酸-甲醇（1:100）適量，加熱回流至提取液無(wú)色，提取液移至25 mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取5mL照柱色譜法置氧化鋁柱上，用乙醇35mL洗脫，收集洗脫液，置50mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻, 為供試品溶液。

注：“柱色譜法”系指色譜柱為內(nèi)徑均勻，下端縮口的硬質(zhì)玻璃管，下端用棉花或玻璃纖維塞住，管內(nèi)裝入吸附劑。吸附劑的顆粒應(yīng)盡可能保持大小均勻，以保證良好的分離效果。

濕法裝柱：將吸附劑與洗脫劑混合，攪拌除去空氣泡，徐徐傾入色譜柱中，然后加入洗脫劑將附著管壁的吸附劑洗下，使色譜柱面平整。

供試品的加入：將供試品溶液沿管壁緩緩加入，注意勿使吸附劑翻起。

操作步驟： 供試品的測(cè)定

精密量取供試品溶液2mL，置50mL量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，在345nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。

注：分光光度法應(yīng)以配制供試品的同批溶劑為對(duì)照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)，一般供試品的吸收度讀數(shù)，以在０.３－０.７之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度偏低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。

參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部，p.416。