丹皮酚的測定—高效液相色譜法
應(yīng)用范圍: 本方法采用高效液相色譜法測定桂枝茯苓丸中丹皮酚的含量。
本方法適用于中成藥桂枝茯苓丸。
方法原理: 供試品于容量瓶中,加甲醇超聲提取,放冷,搖勻,得供試品溶液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離,用紫外吸收檢測器,于波長274nm處檢測丹皮酚的吸收值,計(jì)算出其含量。
試劑: 甲醇(色譜純)
儀器設(shè)備: 1儀器
1.1高效液相色譜儀
1.2色譜柱
YGW-C18(4.6mm×250mm,10μm)
1.3紫外吸收檢測器
2色譜條件
2.1流動相:甲醇 水 = 60 40
2.2檢測波長:274nm
2.3柱溫:35℃
2.4流速:0.8mL/min
試樣制備: 1.稱取供試品
取桂枝茯苓丸(研細(xì))0.3g,精密稱定。
2.對照品溶液的制備
精密稱取一定量的丹皮酚對照品,用重蒸水分別制成25.04、50.08、75.12、100.16、150.24、250.4μg/mL對照品溶液。
3.供試品溶液的制備
將供試品置50mL容量瓶中,加適量甲醇超聲處理1小時(shí),放冷至室溫,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
注:“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟: 1.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
將上述系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的對照品溶液,各進(jìn)樣10μL,以峰面積積分值對濃度進(jìn)行回歸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.供試品溶液的測定
分別精密吸取上述對照品溶液50.08μg/mL與供試品溶液各10μL注入高效液相色譜儀,用紫外吸收檢測器,于波長274nm處測定丹皮酚的峰面積積分值,用外標(biāo)法計(jì)算出丹皮酚的含量。