方法名稱： 亞葉酸鈣片－亞葉酸鈣－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測(cè)定亞葉酸鈣片中亞葉酸鈣的含量。本方法適用于亞葉酸鈣片。

方法原理： 供試品加水溶解并定量稀釋，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)280nm處檢測(cè)亞葉酸鈣的峰面積，計(jì)算出其含量。

試劑：1.甲醇

2.含0.1%四丁基氫氧化銨的磷酸氫二鈉緩沖液取10%四丁基氫氧化銨水溶液8.0mL和磷酸氫二鈉2.2g加水溶解使成780mL，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.8。

儀器設(shè)備：

1.儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按亞葉酸鈣峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2.色譜條件

2.1 流動(dòng)相：甲醇 含0.1%四丁基氫氧化銨的磷酸氫二鈉緩沖液=22 78

2.2 柱溫：40℃

試樣制備：1.含0.1%四丁基氫氧化銨的磷酸氫二鈉緩沖液取10%四丁基氫氧化銨水溶液8.0mL和磷酸氫二鈉2.2g加水溶解使成780mL，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.8。

3. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取亞葉酸鈣對(duì)照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含0.1mg的溶液，即為對(duì)照品溶液。

4. 供試品溶液的制備

取供試品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于亞葉酸20mg），置200mL量瓶中，加水適量，振搖，使亞葉酸鈣溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器于波長(zhǎng)280nm處測(cè)定亞葉酸鈣（C20H21CaN7O7·5H2O）的峰面積，計(jì)算出其含量，并將結(jié)果乘以0.9256。

參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，二部，p.187。