破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時(shí)可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點(diǎn)，因?yàn)楦鞣N蛋白酶對(duì)不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低，尤其應(yīng)注意在緩沖液中加人蛋白酶抑制劑時(shí)應(yīng)充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。

PMSF1)抑制絲氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巰基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);

2)10mg/ml溶于異丙醇中;

3)在室溫下可保存一年;

4)工作濃度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);

5)在水液體溶液中不穩(wěn)定，必須在每一分離和純化步驟中加入新鮮的PMSF。 EDTA

1)抑制金屬蛋白水解酶;

2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;

3)溶液在4℃穩(wěn)定六個(gè)月以上;

4)工作濃度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);

5)加入NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值，否則EDTA不溶解。

胃蛋白酶抑制劑(pepstantin)

l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管緊張肽原酶，組織蛋白酶D和凝乳酶;

2)1mg/ml溶于甲醇中;

3}儲(chǔ)存液在4℃一周內(nèi)穩(wěn)定，-20℃穩(wěn)定6個(gè)月;

4)1作濃度:0.7ug/ml(1umol/L)

5)在水中不溶解。

亮抑蛋白酶肽(leupeptin)

1)抑制絲氨酸和巰基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血漿酶和組織蛋白酶B;

2)lOmg/ml溶于水;

3)儲(chǔ)存液4℃穩(wěn)定一周，-20℃穩(wěn)定6個(gè)月;

4)工作濃度0.5mg/ml。

胰蛋白酶抑制劑(aprotinin)

1)抑制絲氨酸蛋白酶，如血漿酶，血管舒緩素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;

2)lOmg/ml溶于水，pH7~8

3}儲(chǔ)存液4℃穩(wěn)定一周，-20℃穩(wěn)定6個(gè)月;

4)工作濃度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L);

5)避免反復(fù)凍融:

6)在pH>12.8時(shí)失活。

蛋白酶抑制劑混合使用35ug/ml PMSF………………………絲氨酸蛋白酶抑制劑

0.3mg/ml EDTA……………………金屬蛋白酶抑制劑

0.7ug/ml胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin)…………酸性蛋白酶抑制劑

0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)…………廣譜蛋白酶抑制劑