方法名稱：

己烯雌酚原料藥－己烯雌酚－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍：

本方法采用高效液相色譜法測定己烯雌酚原料藥中己烯雌酚的含量。

本方法適用于己烯雌酚原料藥。

方法原理：

供試品經(jīng)乙醇-水（1：1）溶解并定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測己烯雌酚的峰面積，計算出其含量。

試劑：

1. 甲醇

2. 乙醇

儀器設(shè)備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按己烯雌酚反式體峰計算應(yīng)不低于1000，己烯雌酚反式體峰與順式體峰的分離度應(yīng)大于5.0。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：甲醇/水=80/20

2.2 檢測波長：254nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備：

1. 對照品溶液的制備

精密稱取己烯雌酚對照品適量，加乙醇-水（1：1）溶解并定量稀釋制成每1mL中約含己烯雌酚0.1mg的溶液，即為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

精密稱取供試品適量，加乙醇-水（1：1）溶解并定量稀釋制成每1mL中約含己烯雌酚0.1mg的溶液，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長254nm處測定，按外標(biāo)法以己烯雌酚順式體峰面積的1.26倍與己烯雌酚反式體峰面積的和計算出含量。

參考文獻： 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，中國醫(yī)藥科技出版社，2010版，二部，p.39。