方法名稱

復(fù)方甘草口服溶液—嗎啡、愈創(chuàng)甘油醚的測(cè)定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方甘草口服溶液中嗎啡、愈創(chuàng)甘油醚的含量。

本方法適用于復(fù)方甘草口服溶液。

方法原理

嗎啡：供試品經(jīng)固相萃取柱分離后，收集的部分進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)220nm處檢測(cè)嗎啡的吸收值，計(jì)算出其含量。

愈創(chuàng)甘油醚：供試品經(jīng)固相萃取柱分離后，收集的部分進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)220nm處檢測(cè)愈創(chuàng)甘油醚的吸收值，計(jì)算出其含量。

試劑：

1. 乙腈

2. 0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液

3. 0.0025mol/L庚烷磺酸鈉溶液

儀器設(shè)備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

嗎啡：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按嗎啡計(jì)算不低于1000。

愈創(chuàng)甘油醚：辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按愈創(chuàng)甘油醚計(jì)算不低于2000。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相

嗎啡：0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液 0.0025mol/L庚烷磺酸鈉溶液 乙腈=18 18 5

愈創(chuàng)甘油醚：0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液 0.0025mol/L庚烷磺酸鈉溶液 乙腈=18 18 10

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm

2.3 柱溫：室溫

3. 固相萃取柱：用十八烷基硅烷健合硅膠為填充物

試樣制備

1. 稱取供試品

精密量取本品適量。

2. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取嗎啡對(duì)照品，用5%醋酸溶液溶解并制成每1mL含0.01 mg的溶液。精密稱取愈創(chuàng)甘油醚對(duì)照品，用含有30%甲醇的5%醋酸溶液溶解并制成每1mL含0.01 mg的溶液。

3. 供試品溶液的制備

嗎啡：取固相萃取柱一支，依次用甲醇-水（3：1）15mL與水5mL沖洗，再用pH值約為9的氨水溶液（取水適量，滴加氨試液至pH值為9）沖洗至流出液pH值約為9，待用。將上述供試品超聲處理10分鐘，取出，搖勻，精密量取0.5mL，至上述固相柱上，滴加氨試液適量使柱內(nèi)溶液的pH值約為9（上樣前另取同體積的續(xù)濾液預(yù)先調(diào)試，以確定滴加氨試液的量），搖勻，待溶劑滴盡后，用水20mL沖洗，用5%醋酸溶液洗脫，用5mL量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得。

愈創(chuàng)甘油醚：取固相萃取柱一支，依次用甲醇-水（3：1）15mL與水5mL沖洗，再用pH值約為9的氨水溶液（取水適量，滴加氨試液至pH值為9）沖洗至流出液pH值約為9，待用。將上述供試品超聲處理10分鐘，取出，搖勻，精密量取1.0mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻；精密量取0.5mL，至上述固相柱上，收集流出液于5mL量瓶中，待溶劑滴盡后，加含有30%甲醇的5%醋酸溶液洗脫，用5mL量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，即得。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)220nm處測(cè)定嗎啡和愈創(chuàng)甘油醚的吸收值，計(jì)算出其含量。

參考文獻(xiàn)：

中華人民共和國(guó)藥典，國(guó)家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.420。