方法名稱：藿膽丸－鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸的測(cè)定－薄層掃描法

應(yīng)用范圍：該方法采用薄層掃描法測(cè)定藿膽丸中鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸的含量。

該方法適用于中成藥藿膽丸。

方法原理：供試品加入氫氧化鈉加熱皂化，冷卻，離心。取上清液，用濃鹽酸調(diào)PH值，氯仿萃取，回收氯仿蒸干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開(kāi)，以5%硫酸乙醇溶液顯色，用熒光薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λ=366nm測(cè)量鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸吸收度積分值，計(jì)算其含量。

試劑：1. 正己烷

2 .甲醇

3 .醋酸乙酯

4 .醋酸

5 .5%硫酸乙醇

儀器設(shè)備：1 儀器

1.1 定量毛細(xì)管

1.2 薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動(dòng)涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點(diǎn)樣器

1.5展開(kāi)室

2材料

2.1玻板

用20cm ×10cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

試樣制備：1，對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸各1.0mg，置同一5.0mL容量瓶中，以無(wú)水乙醇制成各含0.2mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2，供試品溶液的制備

精密稱取供試品粉末（過(guò)五號(hào)篩-80目）約1g，置三角瓶中，加40%氫氧化鈉溶液20mL，加熱120℃皂化5小時(shí)，冷卻，離心，吸取上清液，濾渣水洗3次，每次30mL，合并上清液，加濃鹽酸調(diào)PH1－2，氯仿萃取5次，每次40mL，合并萃取液，用無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，濾渣用30mL氯仿洗滌，回收氯仿蒸干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇溶于25mL容量瓶中，加至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

操作步驟：1.薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm）取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液適量，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3.展開(kāi)

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（20:25:2:3）10℃以下放置12小時(shí)的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)至8～15cm時(shí)，取出薄層板，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，在100℃烘烤7～8分鐘，取出，晾干。

4.含量測(cè)定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采熒光法線性掃描，激發(fā)波長(zhǎng)λ=366nm測(cè)定鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。