1、原理:在細胞凋亡早期位于細胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸(PS)遷移至細胞膜外測。磷脂結(jié)合蛋白V(Annexin V)是鈣依賴性的磷脂結(jié)合蛋白,它于PS具有高度的結(jié)合力。因此,Annexin V可以作為探針檢測暴露在細胞外測的磷脂酰絲氨酸。故利用對PS有高度親和力的Annexin V,將Annexin V標記上熒光素(如異硫氰酸熒光素FITC),同時結(jié)合使用PI拒染法(因壞死細胞PS亦暴露于細胞膜外測,且對PI高染)進行凋亡細胞雙染法后用流式細胞儀即可檢測凋亡細胞。
2、結(jié)果判斷:正常活細胞Annexin V、PI均低染;凋亡細胞Annexin V高染、PI低染;壞死細胞Annexin V/PI均高染。
3、應用價值:細胞發(fā)生凋亡時,膜上的PS外露早于DNA斷裂發(fā)生,因此Annexin V聯(lián)合PI染色法檢測早期細胞凋亡較TUNEL法醫(yī)學`教育網(wǎng)搜集整理更為靈敏。又Annexin V聯(lián)合PI染色不需固定細胞,可避免PI染色因固定造成的細胞碎片過多及TUNEL法因固定出現(xiàn)的DNA片段丟失。因此,Annexin V聯(lián)合PI法更加省時,結(jié)果更為可靠,是最為理想的檢測細胞凋亡的方法。