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    HLA血清學(xué)定型試驗

    2010-12-18 17:20 來源:
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      HLA-A、B、C、DR或DQ位點的抗原可用血清方法進行檢測,所以稱為SD抗原(serologicallydefinedantigen),其檢測方法目前普遍采用補體依賴的細胞毒(complementdependentcytotoxicyty,CDC)試驗。

      1.試驗方法美國國家衛(wèi)生研究院(NIH)的標準方法如下:將一系列已知特異性的標準分型血清(1μl/孔)按設(shè)計好的方案加到72孔或60孔專用反應(yīng)板中(如暫時不用可以冰凍保存);加入待檢淋巴細胞2000個/1μl/孔,置室溫30min讓抗體與抗原結(jié)合;加入補體(多為家兔混合血清)5μl,置室溫60min;每孔加入5%伊紅2~3μl,使死細胞著色;3~5min后每孔加12%福爾馬林8μl固定細胞;待細胞全部沉淀后用相差顯微鏡或倒置顯微鏡觀察結(jié)果。某孔的著色細胞超過50個即為陽性反應(yīng),說明被檢細胞的HLA型與該孔所加抗體的相一致;否則為不一致。

      2.細胞分離檢測活體可取外周血直接分離;檢測尸體時取淋巴結(jié),制成單個細胞并洗滌后再分離。檢測HLAⅠ類抗原時取單個核細胞層的細胞即可應(yīng)用,因為該層細胞都表達Ⅰ類抗原;但檢測HLA-DR和DQ等Ⅱ類抗原時,就需要進一步分離較純的B細胞(純度達80%以上),因為Ⅱ類抗原不分布在T細胞上。

      3.分型血清試驗用的標準抗血清必須從經(jīng)產(chǎn)婦(尤其多產(chǎn)婦)的血清中篩選,胎盤液或其他體液也可應(yīng)用;也可通過人工免疫獻血員的方法得到。篩選的方法也用CDC試驗,只是將已知與待檢互換。Ⅱ類抗血清篩選后還必須用混合血小板將其中可能含有的Ⅰ類抗體吸收去,因試驗用的B細胞上也有Ⅰ類抗原。許多人嘗試過抗HLA的單克隆抗體,但是多不成功,因鼠源性抗體主要是針對人類的公共抗原而非某個體的HLA私有抗原;還有一個原因是鼠源性抗體多不能固定補體,不能用細胞毒方法進行檢測。

      4.HLA定型板某些專門實驗室將HLA定型血清預(yù)先加到專用的反應(yīng)板上冰凍保存,醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)|收集整理可供自己或出售給他人使用,試驗時只須加入待檢細胞及其它試劑即可。定型板中抗血清的種類要覆蓋本民族或本地區(qū)80%以上的抗原,其中高頻抗原每種抗血清3份以上,低頻抗原每種抗血清2份以上。定型血清板須經(jīng)幾個實驗室認可或有關(guān)部門核準后才能銷售和使用;現(xiàn)在國內(nèi)所做的定型板多限于HLAⅠ類抗原的檢測。

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