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外周血單個核細胞分離的原理的試劑:常用的分層液有Ficoll與Percoll兩種。
Ficoll分層液法:
Ficoll分層液即聚蔗糖-泛影葡胺,是一種較理想的細胞分層液,其主要成分是一種合成的蔗糖聚合物,具有高密度、低滲透壓、無毒性的特點。
主要用于分離外周血中單個核細胞,是一種單次密度梯度離心分離法。
操作時,將分層液置于試管下層,然后將肝素化的全血或白細胞懸液以Hanks或PBS液稀釋后,輕輕鋪于分層液面上,經(jīng)2000rpm15-20min離心后,紅細胞與粒細胞因比重大于分層液,故較快沉于管底。血小板則比重小于分層液而懸浮于血漿中。唯有與分層液比重相當?shù)膯魏思毎土馨图毎芗谘獫{層和分層液的界面中。其分布由上到下依次為:稀釋的血漿層,單個核細胞層,粒細胞層和紅細胞層。
(2)Percoll分層液法:
Percoll是一種經(jīng)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)處理的硅膠顆粒,對細胞無毒性。利用Percoll液經(jīng)高速離心后可形成一個連續(xù)密度梯度的原理,將比重不等的細胞分離純化。其分布由上至下依次為:死細胞組分及血小板分層,富含單核細胞組分層,富含淋巴細胞組分層及紅細胞與粒細胞組分層。