免疫組織化學技術的標本切片方法是檢驗技師考試的內容，醫(yī)學教育網搜集整理相關內容供大家參考。

　　切片方法的選擇：應用于光鏡的免疫組織化學染色的切片厚度一般要求5μm左右，神經組織的研究要求切片厚度在20-100μm，有利于追蹤神經纖維的走行。

　?。?）冰凍切片：是免疫組織化學染色中最常用的一種切片方法。其最突出的優(yōu)點是能夠較完好地保存多種抗原的免疫活性，尤其是細胞表面抗原更應采用冰凍切片。新鮮的組織及已固定的組織均可作冰凍切片。

　　冰凍時，組織中水分易形成冰晶，往往影響抗原定位。一般認為冰晶少而大時，影響較小，冰晶小而多時，對組織結構損害較大，在含水量較多的組織中上述現(xiàn)象更易發(fā)生。冰晶的大小與其生長速率成正比，而與成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的數(shù)量愈多則愈小，對組織結構影響愈嚴重。因此，應盡量降低冰晶的數(shù)量。Fish認為冰凍開始時，冰晶成核率較慢，以后逐漸增加，其臨界溫度為-33℃，從-30℃降至-43℃之間，成核率急劇增加達1018，然后再減慢?；谏鲜隼碚摽刹扇∫韵麓胧p少冰晶的形成。

　?。?）石蠟切片：其優(yōu)點是組織結構保存良好，在病理和回顧性研究中有較大的實用價值，能切連續(xù)薄片，組織結構清晰，抗原定位準確。用于免疫組化技術的石蠟切片制備與常規(guī)制片略有不同：①脫水、透明等過程應在4℃下進行，以盡量減少組織抗原的損失。②組織塊大小應限于2cm×1.5cm×0.2cm，使組織充分脫水、透明、浸蠟。③浸蠟、包埋過程中，石蠟應保持在60℃以下，以溶點低的軟蠟最好（即低溫石蠟包埋）。

　　石蠟切片為常規(guī)制片技術，切片機多為輪轉式，切片厚度2～7μm，應用范圍廣，不影響抗體的穿透性，染色均勻一致。由于甲醛固定、有機熔劑和包埋劑對組抗原有一定的損害及遮蔽，使抗原特征發(fā)生改變。有人報告經蛋白酶消化，可以改善光鏡免疫組化染色強度，常用的有胰蛋白酶、鏈霉蛋白酶及胃蛋白酶等消化法。石蠟切片應入3T℃恒溫箱過夜，這樣烤片可減少染色中脫片現(xiàn)象，切片如需長期貯存，可存放于4℃冰箱內備用。

　　石蠟切片優(yōu)點較多，但在制片過程中要經過酒精、二甲苯等有機溶劑處理，組織內抗原活性失去較多，有人采用冷凍干燥包埋法，可以保存組織內可溶性物質，防止蛋白變性和酶的失活，從而減少了抗原的丟失。該法是將新鮮組織低溫速凍，利用冷凍干燥機在真空、低溫條件下排除組織內水分，然后用甲醛蒸氣固定干燥的組織，最后將組織浸蠟、包埋、切片。此法可用于免疫熒光標記、免疫酶標記及放射自顯影。

　?。?）振動切片：用振動切片機，可以把新鮮組織（不固定不冰凍）切成厚片20～10μm，以漂浮法在反應板進行免疫組織化學染色，然后在解剖顯微鏡下檢出免疫反應陽性部位，修整組織進行后固定，最后按電鏡樣品制備、脫水、包埋、超薄切片、染色觀察等。組織不冰凍，無冰晶形成和組織抗原破壞，在免疫組化染色前避免了組織脫水、透明、包埋等步驟對抗原的損害，能較好地保留組織內脂溶性物質和細胞膜抗原，主要用于顯示神經系統(tǒng)抗原分布研究。這種包埋前染色，尤其適用于免疫電鏡觀察。

　?。?）塑料切片：塑料包埋切片常用包埋劑有甲基丙烯酸鹽類（GMA）及環(huán)氧樹脂類（Epon 812，618），其優(yōu)點是可以同時作光鏡和電鏡檢測，能相互對照所查抗原，定位準確。塑料包埋切片可切出比石蠟切片更薄的切片，光鏡切片可薄至0.5～2μm，故稱半薄切片。GMA保存抗原較好，不與組織產生共聚合，但形態(tài)學結構欠佳。環(huán)氧樹脂如Fpon和Araldite能較好地保存形態(tài)學結構，但在聚合過程中易和組織起作用，改變抗原結構。塑料包埋切片由于處理程序繁多，抗原活性易丟失。同時半薄切片進行免疫染色時，抗血清不易穿透樹脂，因此，塑料切片主要用于免疫電鏡的超微切片前定位。包埋前染色的標本，切片薄切片后不需染色，直接在相差顯微鏡下觀察免疫反應部位呈黑點狀，定位后進一步作超薄切片，這樣，可以明顯提高免疫電鏡陽性檢出率。