參考方法：

　　采用即將替代GB/T5413.10-1997的新國標(biāo)（還沒有醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理正式公布）。

　　方法步驟：

　　1、試劑和耗材：HPLC 級正己烷（CAEQ-4-011518-2500）；無水硫酸鈉（CBEQ-4-103502-1000）；HPLC 級甲醇（CAEQ-4-003302-4000）；HPLC 級冰醋酸（乙酸，CAEQ-4-011245－0500）；HPLC 級二氯 甲烷（CAEQ-4-012001-4000）；維生素K1 標(biāo)準(zhǔn)品（CDCT-C17924400）

　　2、提取：稱取約2.5g（精確到0.1mg）混合均勻的試樣于三角瓶中（含淀粉的試樣加入0.5g淀粉酶），用 30ml溫水溶解，加入1g酯酶，于37℃恒溫空氣震蕩器中震蕩過夜，使其充分酶解。然后加入2ml 10mol/L 氫氧化鈉溶液，轉(zhuǎn)移至500ml 的分液漏斗中，加入50ml 乙醇，充分混勻。再加入50ml正己烷，加塞振搖2min，靜置分層。放出下層于另一個500ml分液漏斗中再次加入50ml正己烷萃取，靜置分層，棄去水相，合并正己烷。加入適量蒸餾水洗有機(jī)相兩次，醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理棄取水相，將正己烷通過無水硫酸鈉過濾到500ml的平底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上40℃下蒸發(fā)至近干，用正己烷轉(zhuǎn)移殘留物到10ml指形瓶中，用氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確加入1ml 正己烷，充分振蕩溶解殘留物，得到待測液，在冰箱中冷凍一小時后備用。

　　3、HPLC 測定方法：

　　4.1 色譜柱：Cnwsil C₁₈，150×4.6mm, 5μm

　　4.2 衍生柱：鋅粉還原柱，35×4.6mm（LAAA-0001）

　　4.3 流動相：甲醇900ml，二氯甲烷100ml，冰醋酸0.3ml，氯化鋅1.5g，無水乙酸鈉0.5g，溶解過0.45濾膜。

　　4.4 進(jìn)樣量：10μL

　　4.5 流 速：1.0mL/min

　　4.6 檢測波長：熒光檢測器：波長EX=243nm EM=430nm

　　Shanghai ANPEL Scientific Instrument Co., Ltd. 醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理

　　4、結(jié)果分析：

　　4.1、分析圖譜

　　VK₁標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（熒光檢測器）0.4ug/ml VK₁標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（熒光檢測器）0.04ug/ml

　　嬰幼兒配方色譜圖（熒光檢測器）

　　5.2、結(jié)果分析

　　用Cnwsil C₁₈（150×4.6mm, 5μm）色譜柱和鋅粉還原柱（35×4.6mm）串聯(lián)柱后衍生法分析嬰幼兒配方食品中的維生素K₁，分離效果良好，峰形對稱，重復(fù)性好。