甲型強心苷在堿性醇溶液中，由于五元不飽和內酯環(huán)上的雙鍵移位產生C-22活性亞甲基，能與活性亞甲基試劑作用而顯色。乙型強心苷在堿性醇溶液中，不能產生活性亞甲基，無此類反應。所以利用此類反應，可區(qū)別甲、乙型強心苷。所產生的有色化合物在可見光區(qū)常有最大吸收，故亦可用于定量。

（1）Legal反應：又稱亞硝酰鐵氰化鈉試劑反應。取樣品1～2mg，溶于2～3滴吡啶中，加3％亞硝酰鐵氰化鈉溶液和2mol／L氫氧化鈉溶液各1滴，反應液呈深紅色并漸漸退去。

（2）Raymond反應：又稱間二硝基苯試劑反應。取樣品約1mg，以少量50％乙醇溶解后加入間二硝基苯乙醇溶液0.1ml，搖勻后再加入20％氫氧化鈉0.2ml，反應液呈藍紫色。

（3）Kedde反應：又稱3，5-二硝基苯甲酸試劑反應。取樣品的甲醇或乙醇溶液于試管中，加入3，5-二硝基苯甲酸試劑（A液：2％3，5-二硝基苯甲酸甲醇或乙醇溶液；B液：2mol／L氫氧化鉀溶液，用前等量混合）3～4滴，溶液呈紅色或紫紅色。

本試劑可用于強心苷紙色譜和薄層色譜顯色劑，噴霧后顯紫紅色，幾分鐘后褪色。

（4）Baljet反應：又稱堿性苦味酸試劑反應。取樣品的甲醇或乙醇溶液于試管中，加入堿性苦味酸試劑（A液：１％苦味酸乙醇溶液；B液：5％氫氧化鈉水溶液，用前等量混合）數滴，溶液呈橙色或橙紅色。此反應有時發(fā)生較慢，需放置15分鐘以后才能顯色。

上述反應可以用來區(qū)別甲型強型苷和乙型強心苷，甲型呈陽性，乙型呈陰性。