方法名稱： 葉酸片－葉酸－高效液相色譜法

應(yīng)用范圍： 本方法采用高效液相色譜法測定葉酸片中葉酸的含量。

本方法適用于葉酸片。

方法原理： 供試品研細(xì)，經(jīng)氨溶液溶解后，用水定量稀釋，進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測葉酸的峰面積，計(jì)算出其含量。

試劑： 1 .甲醇

2. 磷酸二氫鉀

3. 0.1mol/L氫氧化鉀溶液

4. 0.5%氨溶液

儀器設(shè)備： 1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：以磷酸二氫鉀6.8g與0.1mol/L氫氧化鉀溶液70mL，加水稀釋至850mL，并調(diào)節(jié)pH值至6.3±0.1，加甲醇80mL，用水稀釋成1000mL的溶液

2.2 檢測波長：254nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備： 1. 對照品溶液的制備

精密稱取葉酸對照品約5mg，置25mL量瓶中，加0.5%氨溶液約15mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取本品50片（0.4mg規(guī)格）或20片（5mg規(guī)格），精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于葉酸5mg），置25mL量瓶中，加0.5%氨溶液約15mL，置熱水浴中加熱20分鐘，時(shí)時(shí)振搖使葉酸溶解，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長254nm處測定葉酸（C19H19N7O6）的峰面積，計(jì)算出其含量。

參考文獻(xiàn)： 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會(huì)編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005版，一部，p.109。