測(cè)定方法

目的用氣相色譜法測(cè)定鹽酸金霉素中乙醇的殘留量。方法采用80～90目的HayeSEPQ固定相，異丙醇為內(nèi)標(biāo)物，用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定鹽酸金霉素中殘留乙醇的含量。結(jié)果該方法在乙醇濃度范圍0.1～1.0mg/ml內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，響應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)為0.9979，平均回收率為96.8%，變異系數(shù)為1.86%。結(jié)論本法簡(jiǎn)便，靈敏度高，可有效地用于鹽酸金霉素的質(zhì)量控制。

鹽酸金霉素在精制過程中需加入溶媒乙醇，殘留乙醇的濃度若過高將對(duì)人體造成不同程度的損害，為了控制乙醇在鹽酸金霉素中的含量，保證產(chǎn)品的安全可靠性，我們將鹽酸金霉素中殘留乙醇的含量≤0.5%作為內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。

儀器與試藥

儀器日本島津GC-14B氣相色譜儀，江申色譜工作站;1ml，10μl進(jìn)樣器;

試藥鹽酸金霉素（福州抗生素集團(tuán)有限公司，批號(hào)為20010530）;乙醇（AR）、異丙醇（AR）、去離子水;雙蒸水。

色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱2m×3mm的固定相為HayeSEPQ80～90目的不銹鋼柱，柱溫150℃;檢測(cè)器:氫焰檢測(cè)器;氣化溫度:180℃;載氣:N2;壓力:100kpa;進(jìn)樣量:1ul;乙醇、異丙醇的分離度R≥1.5;方法:內(nèi)標(biāo)法。

計(jì)算公式f=（Ai×dr）/（Ar×di）;Ms%=（f×As×di）/（Ai×W）;其中dr、di分別為乙醇、異丙醇的密度;Ar、Ai、As分別為標(biāo)準(zhǔn)乙醇、異丙醇、殘留乙醇的峰面積，dr=0.7893，di=0.7855。

標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品溶液的制備

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備用1ml的吸量管分別準(zhǔn)確吸取1ml乙醇和異丙醇放入盛有少量去離子水的1000ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。

供試品溶液的制備

用1ml吸量管準(zhǔn)確取異丙醇1ml放入盛有少量蒸餾水的1000ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。

在安瓿中，準(zhǔn)確稱取約50mg鹽酸金霉素樣品，用1ml注射器加入（3.2.1）所配制溶液1ml，快速將安瓿封口，置于水浴中，加熱煮沸數(shù)分鐘至樣品完全溶解，取出并冷卻。

方法學(xué)考察

最佳固定相選擇使用15%PEG-2CM白色填料（60～80目）進(jìn)行測(cè)試條件摸索，柱溫60℃，樣品沒有響應(yīng)信號(hào)，柱溫升高雖有響應(yīng)信號(hào)，但靈敏度太低，達(dá)不到色譜要求，無法測(cè)定微量溶媒。使用HayeSEPQ80～90目效果較好。。

定量限試驗(yàn)在（2.1）色譜條件下，基線穩(wěn)定后，計(jì)算基線噪音水平;配制系列濃度梯度溶液進(jìn)樣，以響應(yīng)峰高約10倍基線噪音的試液濃度為該方法定量限。在定量限濃度處，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算響應(yīng)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

表1響應(yīng)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

表2乙醇響應(yīng)峰面積與濃度之間相關(guān)系數(shù)及線性范圍

注:曲線方程為:Y=122271X-565.2

線性關(guān)系分別配制0.1mg/ml，0.15mg/ml，0.20mg/ml，0.25mg/ml，0.30mg/ml，0.40mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)乙醇溶液，在（2.1）色譜條件下，各進(jìn)樣1.0μl記錄譜圖，以濃度C橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)，計(jì)算乙醇響應(yīng)峰面積與濃度之間相關(guān)系數(shù)及線性范圍。

精密度試驗(yàn)分別吸?。?.1）制備液1.0μl，分別進(jìn)樣6次，計(jì)算乙醇/異丙醇的RSD。

回收率試驗(yàn)分別準(zhǔn)確吸取1μl，2μl，3μl，4μl，5μl的AR乙醇溶液，分別加入到已知濃度鹽酸金霉素中測(cè)定其回收率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

經(jīng)過試驗(yàn)，使用HayeSEPQ80～90目測(cè)定微量溶媒靈敏度較高。本法操作簡(jiǎn)便，分析快速準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，回收率高。