【關(guān)鍵詞】  子宮內(nèi)膜異位癥；NF

　　Expressions and correlation of nuclear factorkappaB and vascular endothelial growth factor in endometriosis

　　WANG Fang， HE YuanLi， ZHAO RuZhu， LIU MuBiao， PENG DongXian

　　Department of Gynecology and Obstetrics， Lanzhou General Hospital， Lanzhou Military Area Command， Lanzhou 730050， China，  Department of Gynecology and Obstetrics， Zhujiang Hospital， Southern Medical University， Guangzhou  510282， China

　　【Abstract】AIM： To investigate the expressions of nuclear factorkappaB（NFκB） and vascular endothelial growth factor（VEGF） proteins in endometriosis（EM）， and to evaluate the correlation between NFκB and VEGF expressions. METHODS：  Immunohistochemistry was used to examine the NFκB and VEGF protein expression in 35 specimens of normal endometrium，48 of eutopic endometrium of endometriosis and 76 of ectopic endometrium， and the results were analyzed with SPSS11.0 statistical software. RESULTS： The expressions of NFκB and VEGF were mainly found  in the glandular epithelial cells of the 3 kinds of endometrium， with the ectopic endometriotic tissues showing the highest and the normal endometrium showing the lowest expression （P<0.05）。 Both NFκB and VEGF expressions in proliferative phase were significantly lower than those in secretory phase of normal and ectopic endometria （P<0.05）。 Furthermore， the expressions of NFκB and VEGF proteins were positively correlated in normal endometria， eutopic and  ectopic endometria （rs=0.660， 0.733 and 0.827， respectively， P<0.01）。 CONCLUSION： NFκB and VEGF proteins are highly expressed and show a positive correlation in EM， which suggests that they may participate in the pathogenesis of  EM.

　　【Keywords】 endometriosis；  NFkappaB； vascular endothelial growth factors；  immunohistochemistry

　　【摘要】目的：檢測核轉(zhuǎn)錄因子（NFκB）及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在子宮內(nèi)膜異位癥（EM）中的表達，探討其與EM發(fā)病機制的相關(guān)性。 方法： 采用免疫組化SP法分別檢測NFκB及VEGF在35例正常子宮內(nèi)膜、48例EM在位內(nèi)膜及76例EM異位內(nèi)膜中的表達，并對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果： NFκB和VEGF主要定位于3 組內(nèi)膜腺上皮細胞的胞質(zhì)中，其中異位內(nèi)膜表達強度最強，正常子宮內(nèi)膜的表達強度最弱（P<0.05）。 在位內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜NFκB和VEGF的表達強度隨月經(jīng)周期發(fā)生一定的變化，分泌期高于增殖期，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 NFκB與VEGF之間在正常子宮內(nèi)膜、異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜中的表達具有正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為0.660，0.733和0.827 （P<0.01）。 結(jié)論： NFκB和VEGF在EM患者的在位及異位內(nèi)膜的高表達及二者之間的正相關(guān)性提示其在EM發(fā)病機制中起一定的作用。

　　【關(guān)鍵詞】 子宮內(nèi)膜異位癥；NFκB；血管內(nèi)皮生長因子類；免疫組織化學

　　0引言

　　子宮內(nèi)膜異位癥（ endometriosis， EM）是一種生育期婦女常見的良性疾患，但異位的子宮內(nèi)膜卻具有類似于惡性腫瘤轉(zhuǎn)移、種植、侵襲等生物學特性，而此過程均依賴于新生血管的形成。 血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor， VEGF）是為單一基因編碼的同源二聚體糖蛋白，是最為關(guān)鍵性的血管形成刺激因子。 它可直接而特異作用于血管內(nèi)皮細胞，導致新生血管形成。 NFκB（nuclear factorkappaB）是一種重要的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，參與細胞因子、黏附分子、血管活性調(diào)節(jié)因子的調(diào)節(jié)，研究證實NFκB對于VEGF的調(diào)控與多種惡性腫瘤新生血管的生成有關(guān)［1］。 本文采用免疫組織化學的方法檢測NFκB和VEGF在正常子宮內(nèi)膜和EM患者的在位及異位內(nèi)膜中表達情況，以探討NFκB和VEGF與EM發(fā)病的相關(guān)性。

　　1對象和方法

　　1.1對象選擇199801/200212南方醫(yī)科大學附屬南方醫(yī)院及珠江醫(yī)院病理科保存的76例EM異位內(nèi)膜和48例EM在位內(nèi)膜（增生期28例，分泌期20例）的標本作為研究對象。 選擇同期經(jīng)腹腔鏡確診35例單純輸卵管性不孕癥的患者正常子宮內(nèi)膜標本作為對照組，其中增生期20例，分泌期15例。 研究組和對照組的年齡無統(tǒng)計學差異，月經(jīng)周期規(guī)則，除去其他內(nèi)外科疾病，術(shù)前3 mo無甾體類激素治療史。

　　1.2方法標本經(jīng)40 g/L 甲醛固定，石蠟包埋，4 μm切片，分別做VEGF和NFκB免疫組化標記（兔抗人NFκB多克隆抗體購自北京中山生物公司，即用型工作液，鼠抗人VEGF單克隆抗體購自福建邁新生物公司，工作濃度為1∶50）；采用SP法，按試劑盒說明書步驟進行。 經(jīng)DAB顯色后，蘇木素復染，中性樹膠封固。 用已知的陽性片作為陽性對照，每組均用PBS代替一抗作陰性對照。

　　結(jié)果判斷以細胞胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為判斷標準，按FDA推薦的染色強度分級： ① 陰性（-）： 細胞無著色或陽性細胞數(shù)<5%； ② 弱陽性（+） ：細胞輕度著色呈淡黃色，陽性細胞數(shù)5%～25%； ③ 陽性（） ：細胞著色呈深黃色，陽性細胞數(shù)25%～50%；④ 強陽性（）：細胞明顯著色，呈棕黃色，陽性細胞數(shù)>50%.結(jié)果判斷在雙盲下進行，每張切片由兩名病理科醫(yī)生分別計數(shù)。

　　統(tǒng)計學處理：   應用SPSS11.0 統(tǒng)計軟件對資料進行KruskalWallis 秩和檢驗和Spearman秩相關(guān)分析。

　　2結(jié)果

　　2.13組內(nèi)膜NFκB和VEGF的表達NFκB和VEGF主要表達于3組內(nèi)膜的腺上皮細胞，在異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜的間質(zhì)及血管內(nèi)皮細胞中亦有表達。 3組子宮內(nèi)膜NFκB和VEGF表達強度有統(tǒng)計學差異，對照組表達最弱，異位內(nèi)膜組表達最強（P<0.05）；NFκB和VEGF的表達在對照組增殖期內(nèi)膜和分泌期內(nèi)膜比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；在位子宮內(nèi)膜增殖期和分泌期均有NFκB和VEGF表達，增殖期表達強度低于分泌期（P<0.05）；（表1，圖1~2）。

　　表1NFκB和VEGF在EM患者異位、在位內(nèi)膜及正常子宮內(nèi)膜中的表達（略）

　　A： 分泌期正常子宮內(nèi)膜的陽性表達SP ×200； B： 增殖期在位內(nèi)膜陽性表達SP ×200； C： 子宮腺肌病的陽性表達SP  ×200； D： 卵巢子宮內(nèi)膜異位癥的陽性表達SP ×200.

　　圖1VEGF在組織中的表達（略）

　　2.2NFκB和VEGF在對照組子宮內(nèi)膜、異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜中表達的相關(guān)性3組內(nèi)膜中NFκB與VEGF表達的相關(guān)系數(shù)分別為rs=0.660（P<0.01）， rs =0.733（P<0.01）， rs=0.827（P<0.01），說明兩種因子表達呈正相關(guān)。

　　A： 增殖期正常子宮內(nèi)膜的陰性表達SP ×200；B：分泌期在位子宮內(nèi)膜陽性表達SP ×200；C：子宮腺肌病的陽性表達SP ×200；D：卵巢子宮異位內(nèi)膜及間質(zhì)的陽性表達SP ×100.

　　圖2NFκB在組織中的表達（略）

　　3討論

　　EM真正的病因及發(fā)病機制至今未明。 目前Sampson經(jīng)血逆流種植學說［12］為大家所接受，然而已知多數(shù)婦女經(jīng)期均有經(jīng)血逆流現(xiàn)象，卻僅10%左右發(fā)病，因此，經(jīng)血逆流可能只是EM發(fā)病的基礎(chǔ)，而近來研究表明EM患者的內(nèi)膜具有轉(zhuǎn)移、種植、生長等類似惡性腫瘤細胞生物學行為的能力可能才是EM發(fā)病的關(guān)鍵［3］。 目前研究證實，惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移、種植及生長均依賴于新生血管的形成，而脫落的子宮內(nèi)膜附著于腹膜或其他部位時，異位的子宮內(nèi)膜及其周圍組織新的血供的建立與維持，亦是子宮內(nèi)膜異位種植存活和內(nèi)異癥發(fā)生的基本條件。

　　VEGF是一種多肽類細胞因子。 體外實驗中VEGF 可刺激血管內(nèi)皮細胞增殖，誘導其遷移和形成管腔樣結(jié)構(gòu)，在體內(nèi)實驗中，它可直接誘導新生血管形成。 并且VEGF 還可能增加微血管通透性，通過引起血漿蛋白的高度通透性而誘導間質(zhì)產(chǎn)生，易于血管的生長。 本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)EM 患者的異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜的VEGF 均主要表達于腺上皮及間質(zhì)且強度高于對照組， 說明異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜可能具有組織同源性，即逆流經(jīng)血中的子宮內(nèi)膜高水平表達VEGF，使之易于在盆腔腹膜表面種植。 而且在位內(nèi)膜的VEGF在分泌期腺上皮中的染色強度均明顯增高，提示此階段的子宮內(nèi)膜更易于種植。 由此可見，VEGF 在EM 的發(fā)病機制中有重要作用， EM 的發(fā)生有賴于血管的增生。 VEGF 含量的增高與子宮內(nèi)膜血管生成增多可能是EM 中異位內(nèi)膜成功種植與生長的決定因素。

　　NFκB是一個由復雜的多肽亞單位組成的蛋白家族，它作為信號傳導途徑中的樞紐，參與炎癥、免疫、腫瘤的發(fā)生和發(fā)展、細胞凋亡的調(diào)節(jié)以及胚胎的發(fā)育等多種生理、病理過程的基因調(diào)控，是一種關(guān)鍵性的核轉(zhuǎn)錄因子。 已有的研究表明，NFκB 在腫瘤新生血管形成的調(diào)控中發(fā)揮重要的作用，它的表達上調(diào)可以使多種與腫瘤新生血管形成過程起重要作用的細胞因子，如IL8，腫瘤相關(guān)黏附因子（VCAM1， ICAM1，ELAM1）、腫瘤壞死因子（TNF）及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）［4-5］等的表達增強，而上述的細胞因子已被證實與EM的發(fā)病密切相關(guān)［6-7］。 我們實驗結(jié)果提示NFκB在三組內(nèi)膜中表達強度不同，異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜高于對照組子宮內(nèi)膜，提示異位內(nèi)膜細胞中NFκB的激活與EM的發(fā)病相關(guān)；NFκB與VEGF均主要表達于腺上皮細胞的胞漿中，異位內(nèi)膜的間質(zhì)及血管內(nèi)皮細胞亦有表達，但正常子宮內(nèi)膜間質(zhì)及血管NFκB表達為陰性，提示EM患者NFκB的激活可能使VEGF過度表達，從而促進異位內(nèi)膜新生血管形成；NFκB與VEGF在EM患者異位和在位內(nèi)膜表達的正相關(guān)性，提示NFκB的表達增強可能上調(diào)VEGF的表達強度，從而使逆流的內(nèi)膜易于種植，且種植后具有類似惡性腫瘤的侵襲性與轉(zhuǎn)移性。 由此設想，在EM發(fā)病過程中，NFκB可能對VEGF以及其他與新生血管形成相關(guān)的細胞因子起到中樞性的調(diào)控作用，而且我們研究也可能為抗血管治療EM提供新思路和方案。

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